STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌細(xì)胞CNE2中的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國廣東、廣西及福建等南方地區(qū)的常見惡性腫瘤之一,目前其主要治療方法是放療加化療等綜合性治療,但其5年生存率只有50％左右,晚期病人的治療效果及生存時間更差。本研究旨在觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)體外對鼻咽癌CNE2細(xì)胞的生長影響,同時通過分析其過程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達(dá)變化,揭示EGCG抗鼻咽癌的機(jī)制,為開發(fā)與尋找新藥以提高鼻咽

2、癌的治療效果提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.實驗室體外條件下培養(yǎng)鼻咽癌低分化細(xì)胞株CNE2,用不同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)干預(yù)24h、48h、72h后,分別于倒置顯微鏡下觀察CNE2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。2.使用不同濃度的EGCG作用CNE2細(xì)胞24h、48h、72h后,應(yīng)用MTT法間接檢測細(xì)胞增殖的變化,并計算其增殖抑制率。3.使用不同濃度的EGCG作用于CNE2細(xì)胞48h后,使用Hoechst33258染色觀

3、察細(xì)胞凋亡情況,并計算其凋亡率。4.應(yīng)用Transwell細(xì)胞侵襲實驗檢測不同濃度EGCG作用后的CNE2細(xì)胞侵襲作用的變化。5.使用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度的EGCG作用鼻咽癌細(xì)胞株CNE2不同時間后對細(xì)胞周期的影響。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測EGCG抗鼻咽癌細(xì)胞株CNE2過程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.倒置顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)CNE2細(xì)胞分裂相變少,部分細(xì)胞變圓,隨著EGCG濃度

4、的增加和作用時間的延長,培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)越來越多的細(xì)胞漂浮及壞死的現(xiàn)象。2.MTT法檢測結(jié)果顯示,隨著EGCG的濃度增加及作用時間延長,EGCG對鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的增殖抑制作用不斷增加,且呈濃度與時間依賴性(p<0.05)。3.Hochest33258染色結(jié)果顯示,EGCG處理CNE2細(xì)胞后出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變?nèi)绾怂榱?、核濃縮等。與對照組比較,隨著EGCG濃度的增加,凋亡細(xì)胞數(shù)不斷增多(p<0.05)。4.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:

5、不同濃度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分別作用于CNE2細(xì)胞24h、48h后,停滯在G1/G0期細(xì)胞百分率分別為:(46.67±0.38)%、(55.20±0.33)%、(62.33±0.28)%、(68.65±0.40)%和(49.12±0.28)%、(57.73±0.45)%、(64.36±0.26)%、(69.62±0.33)%。與對照組比較,各實驗組G1/G0期細(xì)胞百分率明顯增加(P<0.05),各實驗組兩兩比較差

6、異顯著(P<0.05),呈濃度與時間依賴性。5.不同濃度EGCG作用CNE2細(xì)胞后,Transwell細(xì)胞侵襲實驗結(jié)果顯示:隨著EGCG濃度的升高,與對照組相比,CNE2細(xì)胞的侵襲作用呈濃度依賴性減弱(p<0.05)。6.逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測結(jié)果顯示:CNE2細(xì)胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相對表達(dá)量隨著EGCG濃度升高與作用時間延長有降低趨勢(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.EGCG呈濃度依賴