HepaCAM和VEGF在膀胱癌中表達(dá)及hepaCAM對膀胱癌細(xì)胞株VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分：
　　 目的:研究膀胱移行細(xì)胞癌中肝細(xì)胞黏附分子(hepatocyte celladhesion molecule,hepaCAM)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)mRNA表達(dá)的相關(guān)性及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。
　　 方法:應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測55例膀胱移行細(xì)胞癌癌組織及癌旁組織中hepaCAM和VEGF mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示膀胱移行細(xì)胞癌組織中hepaC

2、AM mRNA顯著低于癌旁組織(P<0.05)；VEGF mRNA顯著高于癌旁組織(P<0.05)。hepaCAM,VEGF mRNA與膀胱移行細(xì)胞癌的分期有顯著相關(guān)(P<0.05),與性別、年齡及分級無相關(guān)性,且hepaCAM與VEGF mRNA的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.277,P<0.05)。
　　 結(jié)論:膀胱癌組織中hepaCAM基因缺失與VEGF高表達(dá)相關(guān),為深入研究hepaCAM參與膀胱移行細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制奠定了基礎(chǔ)

3、。
　　 第二部分：
　　 目的:分別建立穩(wěn)定表達(dá)hepaCAM蛋白及綠色熒光蛋白(GFP)的膀胱癌T24,BIU-87細(xì)胞株。
　　 方法:使用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染法將攜帶野生型hepaCAM基因的質(zhì)粒(pEGFPN2-hepaCAM)及空載質(zhì)粒(pEGFPN2)轉(zhuǎn)染人膀胱癌T24,BIU-87細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)48h后,用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)的熒光蛋白位置,用含G418培養(yǎng)液篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞。用RT-PCR

4、檢測各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞hepaCAM mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:熒光顯微鏡觀察顯示:空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組T24及BIU-87細(xì)胞綠色熒光分布于整個細(xì)胞；hepaCAM轉(zhuǎn)染組T24及BIU-87細(xì)胞綠色熒光主要分布于胞質(zhì)和胞核的周圍區(qū)域及細(xì)胞突起部分。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:空載體轉(zhuǎn)染組T24及BIU-87細(xì)胞無hepaCAM mRNA的表達(dá)；hepaCAM轉(zhuǎn)染組T24及BIU-87細(xì)胞hepaCAM mRNA均顯著高表達(dá)。
　　

5、 結(jié)論:分別成功建立穩(wěn)定表達(dá)hepaCAM及綠色熒光蛋白的T24及BIU-87細(xì)胞株,為體外研究hepaCAM基因?qū)Π螂装┘?xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移影響奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 第三部分：
　　 目的:體外研究hepaCAM基因?qū)Π螂装┘?xì)胞株VE6F表達(dá)的影響。
　　 方法:用MTT方法檢測三組(分別為hepaCAM轉(zhuǎn)染組,空載體轉(zhuǎn)染組及未處理組)細(xì)胞的增殖能力；RT-PCR及Western blot方法分別檢測三組細(xì)胞VEGF

6、 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示:與空載體轉(zhuǎn)染組和未處理組相比,野生型hepaCAM穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的T24及BIU-87細(xì)胞增殖受到明顯抑制(P<0.05)；RT-PCR方法結(jié)果顯示:與空載體轉(zhuǎn)染組及未處理細(xì)胞相比,T24及BIU-87細(xì)胞野生型hepaCAM轉(zhuǎn)染組VEGF mRNA的表達(dá)下降(P<0.05)；Western blot方法顯示:T24及BIU-87細(xì)胞野生型hepaCAM轉(zhuǎn)染組VEGF蛋白的表達(dá)顯著