姜黃素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞JNK及MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察TNF-α誘導(dǎo)后星形膠質(zhì)細(xì)胞JNK及MCP-1表達(dá)的影響。進(jìn)一步觀察姜黃素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)后星形膠質(zhì)細(xì)胞JNK及MCP-1表達(dá)的影響，為該藥臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:將SD新生2d大鼠大腦皮層進(jìn)行原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，第三次傳代后神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞純度。將培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞分為正常組、姜黃素5μmol·L-1、10μmol·L-1、20μmol·L-1、40μm

2、ol·L-1和80μmol·L-1組，采用MTT檢測(cè)不同濃度下姜黃素對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響。選出姜黃素的最佳劑量。另培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞將其分為6組:正常組(C組)、TNF-α組（T組）、TNF-α+姜黃素組（Cur5組、Cur10組、Cur20組）、TNF-α+溶劑對(duì)照組（D組）。C組不給予任何藥物處理;T組培養(yǎng)基加入20ng·ml-1TNF-α，作用2h; Cur5組、Cur10組、Cur20組分別在給予20ng·ml-1TNF

3、-α前給予5、10、20μmol·L-1姜黃索，提前孵育24h;D組在給予20ng·ml-1TNF-α前給予1μl·ml-1二甲基亞砜(DMSO)，提前孵育24h。用免疫組化和ELISA方法檢測(cè)MCP-1蛋白表達(dá)量的變化。用免疫印跡方法檢測(cè)JNK蛋白表達(dá)量的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.形態(tài)學(xué)變化原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)傳代后，純度較高，并隨逐漸傳代更加純化，形態(tài)也逐漸變化。星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體較大、很扁，形態(tài)不規(guī)則，胞質(zhì)

4、較豐富，細(xì)胞核呈圓形或卵圓形，常偏于胞體的一側(cè)，內(nèi)有1～2個(gè)核仁。培養(yǎng)至20d左右，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，鋪滿培養(yǎng)瓶底部并融合成單層，形成大致均一的扁平細(xì)胞層。
　　 2.細(xì)胞純度鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，在熒光顯微鏡下鏡檢，GFAP標(biāo)記陽(yáng)性者呈綠色熒光，陽(yáng)性率達(dá)95％以上，即大多數(shù)為星形膠質(zhì)細(xì)胞。
　　 3.MTT法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率與姜黃素的濃度存在依賴性，呈反比關(guān)系。當(dāng)姜黃素

5、濃度分別為40μmol·L-1和80μmol·L-1時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。因此，剔除40μmol·L-1和80μmol·L-1的兩個(gè)濃度。
　　 4.MCP-1表達(dá)的變化A、免疫組化:MCP-1在C組中少量表達(dá)，T組中MCP-1表達(dá)明顯升高。姜黃素藥物干預(yù)后，與T組相比，Cur5組和Cur(1)0組MCP-1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Cur20組MCP-1表達(dá)有所下降。D組和T組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 B、ELI

6、SA:與C組相比，T組MCP-1表達(dá)明顯升高。給不同劑量的姜黃素后，與T組相比，Cur5組和Cur10組MCP-1表達(dá)無(wú)顯著差異，而Cur20組MCP-1表達(dá)有所下降。與T組相比，D組MCP-1表達(dá)也無(wú)顯著差異。
　　 C、免疫印跡:與C組相比，T組JNK表達(dá)明顯升高。給不同劑量的姜黃素后，與T組相比，Cur10組JNK表達(dá)有所下降(P＜0.05)。與T組相比，D組JNK表達(dá)也無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論:TNF-α誘導(dǎo)后星