姜黃素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞MMP-9的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　心血管疾病是威脅人類健康最常見的疾病之一，其中由動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)引起的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病CHD)的發(fā)病率及死亡率均占心血管疾病首位，且有上升趨勢(shì)，而且日趨年輕化，引起廣泛關(guān)注。
　　近來(lái)研究表明基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS)是造成斑塊不穩(wěn)定的重要因素之一，它們可以通過降解纖維帽內(nèi)膠原纖維及結(jié)締組織致使纖維帽變薄，從而易于形成不穩(wěn)定斑塊。MMP-9，又稱明膠酶

2、B，是MMPS家族中的一個(gè)重要成員，其作用底物包括明膠Ⅳ，V型明膠原，彈性蛋白等。而V型膠原是粥樣斑塊基底膜和纖維帽的重要組成部分，因此MMP-9在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊(atherosclerotic plaque,AP)內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)降解過程中起著重要的作用。因此對(duì)MMP-9的研究將給動(dòng)脈硬化的診斷、治療和預(yù)防開辟新的前景。
　　本實(shí)驗(yàn)通過觀察姜黃素對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HU

3、VEC)基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)的影響，以及對(duì)腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC)損傷模型基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)的抑制作用，進(jìn)一步探討該藥的藥理作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究方法及內(nèi)容：
　　1.體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞并FⅧ因子對(duì)HUVEC進(jìn)行鑒定，并且進(jìn)行HUVEC細(xì)胞傳代。
　　2.姜黃素對(duì)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)基質(zhì)

4、金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)的影響。
　　將傳代后生長(zhǎng)良好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為六組（空白對(duì)照組；姜黃素6.25μg/mL組；姜黃素12.5μg/mL組；姜黃素25μg/mL組；姜黃素50μg/mL組；姜黃素100μg/mL組）不同濃度的姜黃素作用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24h后，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法觀察各組MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度，采用ELISA的方法測(cè)量各組MMP-9表達(dá)的濃度，以x±S表示結(jié)果，組間差異比較用方差分析(a

5、nalysis of variance，ANOVA)檢驗(yàn)。
　　3.姜黃素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)的抑制作用。
　　將傳代后生長(zhǎng)良好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為五組（空白對(duì)照組；TNF-α組；姜黃素6.25μg/mL組；姜黃素12.5μg/mL組；姜黃素25μg/mL組）加入相同濃度TNF-α誘導(dǎo)半個(gè)小時(shí)后加入不同濃度的姜黃素處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞24小時(shí)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法觀察各組M

6、MP-9的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度，采用ELISA的方法測(cè)量MMP-9表達(dá)的濃度，以x±S表示結(jié)果，組間差異比較用方差分析檢驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.HUVEC在其正常基礎(chǔ)狀態(tài)下表達(dá)一定水平的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPS）。體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞一旦形成卵石樣的單層，即可合成表達(dá)MMP-9。
　　2.姜黃素作用于體外培養(yǎng)的HUVEC后，MMP-9的表達(dá)明顯減少，而且表達(dá)的濃度隨著姜黃素作用濃度的增加而降低，各組之間有明顯差異(P<

7、0.01)。
　　3.人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞在其正?；A(chǔ)狀態(tài)下表達(dá)一定水平的基質(zhì)金屬蛋白酶，經(jīng)TNF-α誘導(dǎo)后MMP-9表達(dá)量上升，在姜黃素的作用下MMP-9的表達(dá)量明顯下降。而且表達(dá)的濃度隨著姜黃素作用濃度的增加而降低，各組之間有明顯差異(P<0.01)。
　　結(jié)果與提示：
　　1.體外培養(yǎng)的HUVEC在其正常基礎(chǔ)狀態(tài)下表達(dá)一定水平的基質(zhì)金屬蛋白酶，經(jīng)姜黃素處理后，MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)明顯受到抑制，而且表達(dá)的濃度隨著姜

8、黃素作用濃度的增加而降低。
　　2.體外培養(yǎng)的正常HUVEC經(jīng)TNF-α誘導(dǎo)后MMP-9陽(yáng)性表達(dá)量上升，在姜黃素的作用下MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)量明顯下降。而且表達(dá)的濃度隨著姜黃素作用濃度的增加而降低。
　　3.姜黃素能夠抑制體外培養(yǎng)的HUVEC細(xì)胞的MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)，從而起到減少細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)、增強(qiáng)斑塊的穩(wěn)定性，恢復(fù)受損血管內(nèi)皮(blood vessel endothelium;BVE)的功能和防止血栓的形成，阻斷促炎因子