骨癌痛小鼠脊髓水平IL-1β和TNF-α的表達(dá)及膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)其的影響.pdf

1、目的: 研究鞘內(nèi)注射(intrathecal injection，I.t.)氟代檸檬酸（fluorocitrate，F(xiàn)C）和米諾四環(huán)素(minocychine，MI)對(duì)骨癌痛小鼠疼痛、腫瘤生長、脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化及脊髓水平IL-1β和TNF-α表達(dá)的影響。
　　 方法: 采用小鼠跟骨癌痛模型。將雄性C3H/He小鼠隨機(jī)分為六組，包括：正常組、假手術(shù)組、癌痛組。其中癌痛組又因鞘內(nèi)給藥不同分為四個(gè)亞組：癌痛+人工腦脊液組（ar

2、tificial cerebrospinal fluid，ACSF 5μl I.t.，ACSF組）、癌痛+FC組（0. 50nmol 5μl I.t.，F(xiàn)C組）、癌痛+MI組(16μg 5μl I.t.，MI組)、癌痛+ MI+FC組(8μg MI和0. 25nmol FC混合液 5μl I.t.，MI+FC組)。術(shù)后每天給藥1次，持續(xù)21天，并于術(shù)前、術(shù)后3d、5d、7d、10d、14d、21d采用機(jī)械性痛覺過敏及冷痛敏測定小鼠行為學(xué)

3、變化、H-E 染色觀察腫瘤骨的骨質(zhì)破壞程度、免疫熒光法觀察小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖活化情況、酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）及免疫熒光法檢測各組小鼠脊髓水平IL-1β和TNF-α表達(dá)的變化，激光共聚焦顯微鏡鏡檢星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α的共表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 ⑴疼痛行為學(xué)測定顯示，與正常組相同時(shí)間點(diǎn)（3d、5d

4、、7d、10d、14d、21d）相比，癌痛各組小鼠出現(xiàn)明顯的疼痛現(xiàn)象，有顯著性差異（P<0.05）。其中癌痛各組內(nèi)，與ACSF組相比，MI、FC、MI+FC組能明顯提高小鼠機(jī)械性刺激及冷刺激疼痛閾值，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 ⑵組織切片H-E 染色觀察骨質(zhì)破壞程度結(jié)果顯示：術(shù)后21d癌痛各組內(nèi)腫瘤細(xì)胞增生活躍并侵犯周圍組織，無顯著性差異（P>0.05）。
　　 ⑶免疫熒光化學(xué)法：與正常組相比，術(shù)后3d小鼠脊髓

5、背角小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)，假手術(shù)組無顯著性差異（P>0.05）；而癌痛各亞組數(shù)量明顯增加，胞體突起增生肥大，呈激活狀態(tài)，有顯著性差異（P<0.05），而術(shù)后14d始脊髓背角星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活。癌痛各組內(nèi)，術(shù)后21d與ACSF組相比，MI組及MI+FC組，術(shù)后3d小膠質(zhì)細(xì)胞活化明顯被抑制有顯著性差異（P<0.05）；MI組、FC組及MI+FC組術(shù)后21d脊髓背角的星形膠質(zhì)細(xì)胞活化明顯被抑制，有顯著性差異（P<0.05）；其中MI+F

6、C組，有極顯著性差異（P<0.01）。
　　 ⑷酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及免疫熒光化學(xué)法：測定脊髓水平IL-1β和TNF-α含量的變化。與正常組相比，術(shù)后3d小鼠脊髓水平IL-1β表達(dá)，假手術(shù)組無顯著性差異；而癌痛各亞組表達(dá)明顯增加，有顯著性差異（P<0.05）。其中癌痛各亞組內(nèi)，與ACSF組相比，MI組、MI+FC組，均相對(duì)較少，有顯著性差異（P<0.05）；而FC組無顯著性差異（P>0.05）。與正常組相比，術(shù)后14d始

7、小鼠脊髓水平TNF-α表達(dá)，假手術(shù)組無顯著性差異（P>0.05）；而癌痛各亞組表達(dá)明顯增加，有顯著性差異（P<0.05）。其中癌痛各亞組內(nèi)，與ACSF組相比，MI組、FC組、MI+FC組，均相對(duì)較少，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 ⑸激光共聚焦顯微鏡鏡檢示，在其表達(dá)高峰期，即術(shù)后3d小膠質(zhì)細(xì)胞與IL-1β有共表達(dá)，而與TNF-α無共表達(dá)；術(shù)后21d星形膠質(zhì)細(xì)胞與IL-1β及TNF-α均有共表達(dá)。
　　 結(jié)論; 在本

8、實(shí)驗(yàn)劑量下
　　 1．小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活分別在跟骨癌痛的產(chǎn)生及維持階段起著重要作用；但二者對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長及組織破壞程度無明顯影響；
　　 2．小膠質(zhì)細(xì)胞的功能狀態(tài)影響星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化，二者共同參與骨癌痛的產(chǎn)生及維持；
　　 3．跟骨癌痛小鼠脊髓背角IL-1β和TNF-α表達(dá)明顯增加；細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α是膠質(zhì)細(xì)胞參與骨癌痛調(diào)控的重要途徑之一；4．在跟骨癌痛中，小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞是