骨髓間質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植對(duì)損傷大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-α、IL-1β表達(dá)的影響.pdf

1、目的探討骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷的作用及可能機(jī)制。 方法1．體外分離培養(yǎng)rMSCs，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)其表面標(biāo)志。 2．運(yùn)用改良Allen法制備大鼠胸10脊髓外傷性截癱模型，假手術(shù)組12只，損傷組120只隨機(jī)分為對(duì)照組和rMSCs移植組，每組有3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天、14天7個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只大鼠(其中3天、7天、14天這3個(gè)時(shí)相點(diǎn)每組各12只大鼠)。對(duì)照組和rMSCs移植組

2、、假手術(shù)組于損傷后10min經(jīng)尾靜脈分別注射磷酸鹽緩沖液(PBS)lml和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)標(biāo)記rMSCs單細(xì)胞PBS懸液lml(1x106個(gè)rMSCs)。 3．移植后24小時(shí)、3天、7天、14天，應(yīng)用BBB評(píng)分法評(píng)價(jià)治療前后損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能改善狀況。 4．移植后14天，應(yīng)用光鏡及電子顯微鏡觀(guān)察損傷脊髓組織形態(tài)學(xué)變化；移植后3天、7天，應(yīng)用熒光激發(fā)及免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)rMSCs在體內(nèi)遷移、存活情況

3、及損傷大鼠脊髓腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NerveGrowthFactor,NGF)、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-a,TNF-α)、白介素-1p(interleukinl-β，IL-1β)蛋白表達(dá)變化情況。 5．移植后3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天、14天，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法

4、檢測(cè)損傷大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-(1、IL-1pmRNA表達(dá)變化情況。 結(jié)果1．rMSCs移植組與對(duì)照組損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)功能均有不同程度的恢復(fù)。rMSCs移植組損傷區(qū)脊髓結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比，相對(duì)較完整，表現(xiàn)出較明顯的運(yùn)動(dòng)功能改善(P<0．05)。 2．rMSCs移植組可見(jiàn)DAPI標(biāo)記的細(xì)胞在損傷區(qū)及其周邊區(qū)明顯聚集并存活。 3．對(duì)照組和rMSCs移植組損傷脊髓IL．1B、TNF-ct、BDNF、NGF蛋白及

5、其mRNA表達(dá)較假手術(shù)組有明顯增加(p<0．05)；rMSCs移植組與對(duì)照組比較，IL．1β、TNF-et蛋白及其mRNA表達(dá)受到明顯抑制(p<0．05)，而rMSCs移植組與對(duì)照組比較，BDNF、NGF蛋白及其mRNA表達(dá)增加更為明顯(P<0．05)。 結(jié)論rMSCs靜脈移植后在宿主體內(nèi)可向損傷處脊髓遷移、存活并改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境，上調(diào)損傷脊髓局部的BDNF、NGF，使TNF-a、IL-1β表達(dá)降低。這可能是減少脊髓繼發(fā)性