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1、目的：(1)研究辛伐他汀對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)骨髓MSCs凋亡的影響。(2)研究辛伐他汀對(duì)TNF-α誘導(dǎo)體外培養(yǎng)骨髓MSCs caspase-3蛋白活性的影響。 方法：采取密度梯度離心及反復(fù)貼壁細(xì)胞分離法，分離和純化小鼠骨髓MSCs，體外培養(yǎng)，選用第4代小鼠骨髓MSCs作為研究對(duì)象。(1)MSCs的凋亡率用AnnexinV/PI雙染色進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢查技術(shù)，檢測(cè)正常對(duì)照組； TNF-α刺激組；辛伐他汀預(yù)處理組的凋亡率。比較T
2、NF-α刺激組與正常對(duì)照組；不同濃度的TNF-α刺激亞組相互間；辛伐他汀預(yù)處理組與0.5ng/mlTNF-α刺激亞組；各辛伐他汀預(yù)處理亞組與正常對(duì)照組以及辛伐他汀預(yù)處理亞組相互間凋亡率差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)采用caspase-3檢測(cè)試劑盒，用酶標(biāo)儀，在λ=405nm測(cè)定：正常對(duì)照組；TNF-α刺激組；辛伐他汀預(yù)處理組的吸光值(OD值)。比較TNF-α刺激組與正常對(duì)照組；不同濃度的TNF-α刺激亞組相互間；辛伐他汀預(yù)處理組與0.5ng
3、/mlTNF-α刺激亞組，辛伐他汀預(yù)處理組與正常對(duì)照組以及不同濃度的辛伐他汀預(yù)處理亞組相互間OD值差別有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述數(shù)據(jù)均采用SPASSl3.0統(tǒng)計(jì)軟件單因素方差分析，以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： (1)各組凋亡率(％)為：正常對(duì)照組10.21±1.46；0.05ng/mlTNF-α刺激亞組30.27±2.71；0.5ng/ml TNF-α刺激亞組35.38±2.00；5ng/ml TNF-α刺激亞組41.8
4、±2.53；1.0×10-7M辛伐他汀預(yù)處理亞組23.6±2.94；1.0×10-6M辛伐他汀預(yù)處理亞組17.18±2.52；1.0×10-5 M辛伐他汀預(yù)處理亞組22.68±2.03。(2)各組酶標(biāo)儀測(cè)定的OD值為：正常對(duì)照組0.112±0.013；0.05ng/mlTNF-α刺激亞組0.466±0.042；0.5ng/mlTNF-α刺激亞組0.692±0.041；5ng/mlTNF-α刺激亞組0.829±0.040；1.O×10-7
5、M辛伐他汀預(yù)處理亞組0.348±0.027；1.0×10-6 M辛伐他汀預(yù)處理亞組0.275±0.021；1.0×10-5M辛伐他汀預(yù)處理亞組0.350±0.018。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：TNF-α刺激組與對(duì)照組凋亡率及OD值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.05；各TNF-α刺激亞組凋亡率及OD值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05；辛伐他汀預(yù)處理組與0.5ng/mlTNF-α刺激亞組凋亡率及OD值兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05，辛伐他
6、汀預(yù)處理組與正常對(duì)照組凋亡率及OD值兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；1.0×10-7M辛伐他汀預(yù)處理亞組與1.0×10-6 M辛伐他汀預(yù)處理亞組MSCs凋亡率及OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05，1.0×10-5 M辛伐他汀預(yù)處理亞組與1.0×10-6 M辛伐他汀預(yù)處理亞組比較MSCs凋亡率及OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.05，1.0×10-5 M辛伐他汀預(yù)處理亞組與1.0×10-7 M辛伐他汀預(yù)處理亞組比較MSCs凋亡率及OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)
7、學(xué)意義，p>0.05。 結(jié)論 (1)TNF-α可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)骨髓MSCs凋亡，且MSCs凋亡升高呈TNF-α濃度依賴性。(2)辛伐他汀預(yù)處理可部分抑制TNF-α誘導(dǎo)的骨髓MSCs的凋亡。(3)與1.0×10-5M，1.0×10-7M相比，1.0×10-6辛伐他汀預(yù)處理為可供選擇的理想濃度。(4)TNF-α誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的MSCs凋亡可能部分通過(guò)激活caspase-3實(shí)現(xiàn)的。(5)辛伐他汀抑制TNF-α誘導(dǎo)MSCs的凋亡可能與其抑制
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