TNF-α對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫學(xué)特性的影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一種具有多向分化潛能的非造血性干細(xì)胞，具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究旨在體外分離純化、克隆擴(kuò)增MSCs條件下研究其免疫調(diào)節(jié)作用以及RA疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中一種重要的細(xì)胞因子TNF-α對(duì)其免疫調(diào)節(jié)作用有何影響，以探討MSCs治療RA的可能性。 方法：應(yīng)用密度剃度離心加貼壁篩選法分離純化克隆擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)志以鑒定MSC

2、s純度。用四甲基偶氮鹽(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞增殖，分別觀察有無(wú)TNF-α存在下MSCs對(duì)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。ELISA法檢測(cè)在有無(wú)TNF-α存在下MSCs上清中細(xì)胞因子IL-6含量變化情況。 結(jié)果：MSCs屬骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞，密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法能有效分離純化大鼠骨髓MSCs；細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，長(zhǎng)成單層時(shí)呈均一的成纖維細(xì)胞樣。流式檢測(cè)MSCs表型，即CD14-，CD34-，CD45-，CD29+(94.4

3、5％)，CD105+(87.36％)。1×10<'5>，5×10<'4>，1×10<'4>MSCs對(duì)MLR均呈抑制作用，抑制率隨細(xì)胞數(shù)減少而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1×10<'5>的MSCs對(duì)于ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖呈抑制作用，方差分析顯示與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MSCs上清對(duì)于CONA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖也呈抑制作用。方差分析顯示與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在TNF-α存在

4、下顯示MSCs不能抑制混合淋巴反應(yīng)中的淋巴細(xì)胞增殖。ELISA法檢測(cè)與TNF-α共培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞上清中IL-6的表達(dá)與MSCs單獨(dú)培養(yǎng)組相比明顯增加(P<0.05)。 結(jié)論：本研究獲得了體外分離純化、培養(yǎng)擴(kuò)增骨髓MSCs的簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、高效方法并顯示其具有多向分化潛能；觀察到體外條件下MSCs能抑制同種異體混合淋巴反應(yīng)以及絲裂原誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖：而在TNF-α存在下MSCs的免疫抑制特性被逆轉(zhuǎn)，推測(cè)可能與TNF-α存在下MS