骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本課題研究目的：研究BMSCs腦內(nèi)移植治療缺血性腦卒中的效果，探討：BMSCs治療缺血性腦卒中的可能機(jī)制及細(xì)胞體內(nèi)的追蹤技術(shù)，為干細(xì)胞治療缺血性腦卒中的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究?jī)?nèi)容和方法：擬建立大鼠大腦中動(dòng)脈梗阻(middle cerebral atery occlusion，MCAO)腦缺血模型，采用腦立體定向BMSCs移植的方法進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究。課題研究共分為三部分。第一部分：通過(guò)培養(yǎng)近交系Wistar大鼠的BMSCs，進(jìn)行

2、細(xì)胞腦內(nèi)移植，利用進(jìn)口電生理儀器監(jiān)測(cè)腦卒中大鼠細(xì)胞治療前后腦電生理的變化并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；第二部分：利用免疫熒光技術(shù)、ELISA技術(shù)、real-time定量RT-PCR技術(shù)以及動(dòng)物行為學(xué)評(píng)價(jià)體系研究人骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrowmesenchymal stem eells，hBMSCs)移植到腦卒中大鼠腦內(nèi)后細(xì)胞的存活時(shí)間、遷移、分化、腦內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌水平的變化以及多角度行為學(xué)的變化規(guī)律等。第三部分：利用超順

3、磁性氧化鐵離子Feridex標(biāo)記BMSCs，將Feridex標(biāo)記的BMSCs移植到卒中腦內(nèi)后進(jìn)行高場(chǎng)強(qiáng)磁共振的體內(nèi)活體追蹤，以研究細(xì)胞的存活、遷移及對(duì)腦梗死體積的影響；從電生理、形態(tài)學(xué)、功能學(xué)及影像學(xué)等方面探索BMSCs治療缺血性腦卒中的機(jī)制和依據(jù)。 研究結(jié)果： 1.腦內(nèi)移植BMSCs后治療組和對(duì)照組相比可以促進(jìn)腦電快波的恢復(fù)，減少腦梗死后的慢波比例，并且相同監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)的腦電圖平均波幅有顯著提高，細(xì)胞的移植促進(jìn)了實(shí)驗(yàn)大鼠

4、的神經(jīng)興奮性。 2.在細(xì)胞移植后的第1、2周細(xì)胞大量存活并向病灶遷移，第3周細(xì)胞存活數(shù)量明顯減少，第4周存活細(xì)胞極少；hBMSC在大鼠腦內(nèi)沒(méi)有明確表達(dá)MAP2、GFAP和GalC等神經(jīng)細(xì)胞的特異蛋白。 3.神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的測(cè)定結(jié)果顯示，治療組和對(duì)照組四種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)水平在細(xì)胞移植后的不同時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的顯著差異，但在第4周均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。 4.行為學(xué)方面BMSCs移植治療10天后治療組大鼠的運(yùn)功功能、

5、感覺(jué)功能以及學(xué)習(xí)記憶能力均有不同程度的改善。 5.磁共振追蹤顯示移植后第14天BMSCs有向缺血灶邊緣遷移、彌散的趨勢(shì)，但是細(xì)胞移植不能影響大鼠腦梗死體積的變化。 結(jié)論： BMSCs腦內(nèi)移植可以顯著改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)，提高大鼠腦電生理的神經(jīng)興奮性；移植細(xì)胞在大鼠腦內(nèi)可以向病灶周圍遷移，但是細(xì)胞存活有一定時(shí)限性；BMSC在大鼠腦內(nèi)沒(méi)有明確分化為神經(jīng)細(xì)胞，但是可以在細(xì)胞移植后的一段時(shí)間內(nèi)促進(jìn)卒中腦內(nèi)的神經(jīng)營(yíng)