不同途徑移植骨髓間充質(zhì)干細胞治療大鼠腦缺血性損傷的實驗研究.pdf

1、目的：通過立體定向和尾靜脈途徑移植大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)到大腦中動脈閉塞模型(MCAO)的大鼠腦內(nèi)，觀察MSCs移植對大鼠缺血性腦損傷后神經(jīng)功能恢復的作用并探討其作用機制和比較、篩選移植途徑。 方法：取體重150gSprague-Dawley大鼠長骨的骨髓細胞，把MSCs分離出來傳代和擴增，用FGF-2預誘導24小時，在細胞移植前24小時，在預誘導和未誘導的MSCs中摻入10mg/L的BrdU進行標記，用于動物實驗。

2、 用改良的ZeaLonga線拴法制作腦缺血再灌注模型，并采用大鼠的頭MRI檢查判斷腦缺血的部位和范圍。 將40只造模成功的SD大鼠隨機分為5組，每組各8只。立體定向移植組(I、II)、尾靜脈移植組(III、IV)和對照組(V)，其中立體定向和尾靜脈組各包括移植預誘導MSCs和未誘導MSCs的兩組，對照組僅造模。立體定向移植組和尾靜脈移植組在造模1周后分別經(jīng)立體定向和尾靜脈途徑將標記Brdu的MSCs(預誘導和未誘導)懸液植

3、入腦缺血大鼠體內(nèi)，其中立體定向組將MSCs植入患側(cè)的紋狀體內(nèi)。然后進行如下處理：①比較各組大鼠的不同移植時間(1d、2w、1m、2m、3m)的神經(jīng)功能評分(NSS)的差異②各組大鼠分別于移植后1m、2m、3m三個時間點處死，灌注取腦，固定、包埋、切片。③以Brdu、NSE和GFAP作為增殖、分化的標記物。免疫組化染色方法檢測Brdu陽性細胞、Brdu+NSE與Brdu+GFAP的雙陽性細胞。檢測各組大鼠的BDNF分泌水平。④探討不同途徑

4、移植的MSCs在腦缺血大鼠的腦內(nèi)的存活、遷移及分化情況，并探討機制。 結果：通過換液、傳代，MSCs被分離和純化，細胞形態(tài)為梭形，呈漩渦狀。流式細胞儀檢測CD90的陽性率為99％，CD34為0.3％，CD31為3.4％，證實了本試驗分離培養(yǎng)的細胞為間充質(zhì)干細胞。用線栓法造MCAO模型后，大鼠表現(xiàn)為線栓動脈對側(cè)的肢體癱瘓，頭MRI檢測證實造模成功。 移植后1d時各組的NSS評分達高峰，各組之間無統(tǒng)計學差異(p>0.05)，

5、在2w、1m、2m、3m時各移植組NSS評分均低于對照組(p<0.05)；在2w時尾靜脈組的NSS評分低于立體定向組(p<0.05)；1m時移植組間無統(tǒng)計學意義(p>0.05)：2m、3m時立體定向移植組的NSS評分低于尾靜脈組；2w、1m、3m時預誘導和未誘導組NSS評分無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；2m時預誘導組NSS低于未誘導組(p<0.05)； 免疫組化染色結果發(fā)現(xiàn)移植后1個月時各移植組均可見到Brdu+NSE、Brdu

6、+GFAP免疫組化雙染陽性細胞，2個月時預誘導組的雙染陽細胞多于未誘導組，3個月時各組間無明顯差異。立體定向組在梗死側(cè)半球的移植區(qū)有較多的Brdu陽性細胞，多分布在針道的周圍，對側(cè)半球未見Brdu陽性細胞。尾靜脈組見到雙側(cè)半球均可見Brdu陽性細胞，梗死側(cè)多于對側(cè)。移植組的BDNF的分泌量明顯高于對照組，其中立體定向組又高于尾靜脈組(p<0.05)。 結論：MSCs可在體外分離、培養(yǎng)及傳代。 以立體定向和尾靜脈兩種途徑移