經(jīng)尾靜脈注射移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠缺血性腦卒中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中圖分類號(hào)UDC碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼密級(jí)10533經(jīng)尾靜脈注射移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠缺血性腦卒中的實(shí)驗(yàn)研究StudiesofHumanUmbilicalCordMesenchymalStemCellsIntravenousInjectiveTransplantationviaVenaCaudalisinRatswithIschemic作者姓名：曾瑛學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導(dǎo)教師：劉

2、平教授副指導(dǎo)教師：羅建光教授論文答辯日期蘭竺墮壘!!答辯委員會(huì)主席中南大學(xué)二。一三年五月經(jīng)尾靜脈注射移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠缺血性腦卒中的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：體外培養(yǎng)原代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUMSCs)，并對(duì)其進(jìn)行傳代擴(kuò)增，觀察及鑒定其生物學(xué)特性，經(jīng)尾靜脈注射移植hUMSCs治療缺血性腦卒中，探討其作用機(jī)理并且提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：取足月妊娠健康

3、新生兒臍帶，PBS充分沖洗，剔除臍帶血管及羊膜，將華通膠(Wharton’Sjelly)剪碎至lmm3大小，將組織植入培養(yǎng)皿中，在含有10％胎牛血清(fetalbovinesenun，F(xiàn)BS)、10ng／ml堿性成纖維生長(zhǎng)因子的DMEM／F12中培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞融合至80％90％后原代細(xì)胞培養(yǎng)完成，進(jìn)行消化傳代。收集P5代細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面表型，包括FITC—CD29、FITC—CD44、FITC—CD34、FIT

4、CCD45、FITCCD105、CDl06、FITCmADR等，并以FITC標(biāo)記的二抗IgG作為同型對(duì)照。動(dòng)物模型：選取左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞再灌注模型(MiddleCerebralArteryOcclusionMCAO)，選取重量250～2809之間的雄性成年SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，待麻醉后取頸部正中切口，從頸總動(dòng)脈結(jié)扎遠(yuǎn)端插入026mm尼龍線頭約18cm，末端置于左側(cè)大腦中動(dòng)脈開口處，2小時(shí)后拔出尼龍線再灌注，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，對(duì)照組不插入

5、尼龍線。術(shù)后24小時(shí)行改良神經(jīng)功能評(píng)分(modifiedneurologicalseverityscore，mNSS)，并進(jìn)行MRI檢查及TTC染色，觀察梗死的情況。選取mNSS評(píng)分在7～12分的大鼠隨機(jī)分組：(1)hUMSCs移植組n=17，細(xì)胞移植量3106；(2)磷酸鹽緩沖液(PhosphateBufferedSaline，PBS)對(duì)照組，n=13。造模后24小時(shí)進(jìn)行移植，經(jīng)大鼠尾靜脈注入CMDil標(biāo)記的hUMSCs細(xì)胞懸液，術(shù)后