大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及對T淋巴細胞免疫功能的影響.pdf

1、近年來的研究發(fā)現(xiàn)，骨髓間充質(zhì)干細胞具有可塑性，在特定的條件下可分化為各胚層來源的組織細胞，稱為橫向分化(transdifferentiation)，這一發(fā)現(xiàn)不僅對于細胞生物學(xué)理論的發(fā)展有重大意義，對于各種因素導(dǎo)致的組織和器官病變以及遺傳缺陷性疾病的細胞替代治療也具有深遠的影響。由于骨髓MSCs易于分離培養(yǎng)和體外擴增，可自體移植無免疫排斥反應(yīng)等特點，因此利用骨髓MSCs橫向分化潛能，可以根據(jù)需要將其誘導(dǎo)分化為特定的組織細胞，用以修復(fù)受損的

2、組織或器官，這也將為免疫功能紊亂的治療提供了另一條途徑。 在骨髓MSCs應(yīng)用過程中，它與血管內(nèi)皮細胞或組織細胞及細胞外基質(zhì)(extraccllularmatrix，ECM)的粘附是發(fā)揮修復(fù)治療作用的第一步。研究證明，粘附分子在細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)問粘附過程中起著重要的作用。因此，探討骨髓MSCs的黏附分子的生物學(xué)及分子學(xué)基礎(chǔ)就顯得尤為重要。 近年來愈來愈多的研究還顯示了MSCs具有免疫調(diào)節(jié)特性，使其在免疫抑制方面

3、具有可預(yù)期的理論意義和使用價值。 就此，本課題第一部分系統(tǒng)研究了骨髓MSCs的分離培養(yǎng)、體外擴增及黏附分子測定，第二部分重點研究了骨髓間充質(zhì)干細胞對T淋巴細胞免疫功能的影響。 試驗一：大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及黏附分子測定 目的：探討體外分離培養(yǎng)和擴增大鼠間充質(zhì)干細胞(MSCs)的最佳條件，并對其進行表型鑒定及黏附分子測定。 方法：采用全骨髓直接貼壁法獲得原代大鼠骨髓MSCs，差速貼壁結(jié)合消化控制法

4、純化細胞，Ⅰ型膠原作為細胞外基質(zhì)擴增MSCs；鏡下觀察細胞生物學(xué)形態(tài)及生長狀態(tài)，流式細胞儀檢測第4代MSCs的細胞周期，免疫細胞化學(xué)方法對其進行表型鑒定與細胞黏附分子檢測。 結(jié)果：原代培養(yǎng)的MSCs呈圓形、梭形、多角形等，24h內(nèi)即可見少量細胞體壁伸展，7～8d左右可達90％融合，純化擴增后的MSCs呈均勻一致的長梭形，24h內(nèi)細胞已基本貼壁，傳代周期為5d左右。流式細胞儀檢測顯示，第4代MSCs約有80％處于G0/G1期。免疫

5、細胞化學(xué)顯示，MSCsCD34、CD45表達陰性，CD29、CD105、CD166、VLA-4、P-selectin表達陽性。 結(jié)論：本實驗方法能很容易地獲得大量高純度的MSCs，并表達一定的黏附分子，為MSCs進一步臨床應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ)。 試驗二：骨髓間充質(zhì)干細胞對T淋巴細胞免疫功能的影響 目的：探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞對T淋巴細胞免疫功能的影響。 方法：采用試驗一的方法分離獲得MSCs，尼龍棉柱法