小鼠骨髓間充質干細胞在體外對淋巴細胞增殖和細胞凋亡的影響.pdf

1、骨髓間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是骨髓基質的祖先細胞，具有多向分化的能力。MSCs同時還具有調節(jié)免疫系統(tǒng)的作用。實驗證實MSCs可以減少移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率并減輕其嚴重程度，能夠延長皮膚移植物的存活時間。目前有許多關于MSCs的免疫調節(jié)方面的報道，關于MSCs對淋巴細胞抑制效應的研究尤其多，但是MSCs免疫抑制的機制目前并不清楚。 研究目的：本文探討骨髓間充質干細胞對淋巴

2、細胞增殖和凋亡的影響及其可能的機制。 實驗方法：常規(guī)分離培養(yǎng)BALB／c鼠的MSCs細胞，經(jīng)傳代3代后得到形態(tài)和免疫表型典型、具有多向分化特性的MSCs細胞，實驗前用<'60>Co照射30Gy備用。從BALB／c鼠外周血和脾臟分離單個核細胞，經(jīng)體外常規(guī)純化后得到反應淋巴細胞，在PHA、IL-2和ConA分別作用下，MSCs和淋巴細胞按1：4比例進行混合培養(yǎng)。培養(yǎng)72小時后，用MTT法檢測淋巴細胞的存活數(shù)量，并用流式細胞術檢測淋巴

3、細胞表面CD3和Ly-43的表達。細胞凋亡檢測采用Hoechest 33258染色、Annexin V流式檢測和DNA電泳實驗。提取淋巴細胞的mRNA進行凋亡相關基因芯片的檢測，獲取可能參與凋亡的分子的信息。實時定量PCR檢測淋巴細胞核因子-KB的表達是否有變化。 實驗結果：淋巴細胞混合培養(yǎng)實驗顯示，在PHA(5μg／mL和10μg／ml_，)、IL-2(500U／mL和1000U／mL_)、ConA(5μg／mL和10μg／m

4、L)分別作用下，加入MSCs的淋巴細胞組(L+MSCs組)A均值比未加MSCs的對照淋巴細胞組(L組)明顯減少，兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。流式細胞術檢測顯示L+MSCs組CD3+Ly-43+淋巴細胞比例較對照L組減少，分別為15.8％、9％(PHA組)和5.3％、3.4％(IL-2組)。Hoechest 33258染色顯示L+MSCs組淋巴細胞有分裂的細胞核小塊出現(xiàn)；Armexin V檢測顯示L+MSCs組Annexin

5、 V+PI-淋巴細胞比例較對照L組增加，分別為6.3％、O.8％(18h)和24.4％、9.9％(42h)：DNA電泳顯示L+MSCs組出現(xiàn)典型的DNA ladder。凋亡相關基因芯片結果顯示96個被檢測基因中有15個表達上調，包括Fas、FasL和hrk； 32個表達下調，例如凋亡抑制物IAP-2、IAP-3、NAIP-2和NAIP-5。核因子-KB的RT-PCR結果顯示L+MSCs組的核因子-KB表達比L組有顯著增高。

6、結論：MSCs對淋巴細胞的增殖有抑制作用，并使淋巴細胞表面活化標記的Ly-43表達比例減少。多種細胞凋亡檢測證實，在MSCs存在下，淋巴細胞發(fā)生了凋亡現(xiàn)象。凋亡相關基因芯片檢測顯示某些凋亡相關基因的表達發(fā)生了改變，如：Fas、：FasI、IAP-2、IAP-3等。RT-OPCR顯示NF-KB的表達發(fā)生了改變。這些基因有可能參與了：MSCs誘導的淋巴細胞凋亡過程。 骨髓間充質干細胞是骨髓基質的祖先細胞，具有多向分化的能力。近年來