乳鼠骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞抑制樹突狀細(xì)胞成熟和T淋巴細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：初步研究小鼠乳鼠骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)的分離培養(yǎng)、純化方法,并進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)志和體外分化能力的鑒定;檢測骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞對于樹突狀細(xì)胞(DCs)抑制成熟的作用,以及對異體T淋巴細(xì)胞的抑制作用。
　　方法：全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)C57BL/6乳鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs),經(jīng)過傳代純化后的第四代細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面CD34、CD29、CD105、MHC-Ⅱ抗原的表達(dá);同時(shí)取第四代細(xì)胞體外誘導(dǎo)向

2、成脂、成骨方向分化以鑒定MSCs。獲取Balb/c小鼠骨髓細(xì)胞,在含重組小鼠粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子GM-CSF(20μg/L)和重組小鼠白細(xì)胞介素4(IL-4,10μg/L)的完全培養(yǎng)基中對其進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)及擴(kuò)增,培養(yǎng)至第8天收獲DCs;實(shí)驗(yàn)分為4組:單純對照組,LPS刺激組,DCs加MSCs共培養(yǎng)組,LPS刺激的DCs加MSCs共培養(yǎng)組;用流式細(xì)胞學(xué)檢測DCs的表面標(biāo)志CD11C、CD86、MHC-Ⅱ的變化。建立混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系,

3、檢測MSCs體外抑制T淋巴細(xì)胞增殖的能力,實(shí)驗(yàn)分為3組:陰性對照組為C57BL/6的T淋巴細(xì)胞,空白對照組的DCs刺激T淋巴細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)干預(yù)組為MSCs于DCs共培養(yǎng)后刺激T淋巴細(xì)胞。
　　結(jié)果：小鼠乳鼠提取培養(yǎng)出的骨髓源性MSCs,體外可以大量增殖,細(xì)胞干性穩(wěn)定;純化后的第四代可以向成骨、成脂方向分化,并且MSCs經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測CD29、MHC-Ⅱ、CD105及CD34表分別為98.300％、0.898%、45.400%、0.8

4、49%,符合MSCs抗原表達(dá)。BM-MSCs與DCs的共培養(yǎng),抑制了DCs表面MHC-Ⅱ和共刺激分子CD86的表達(dá),抑制DCs的發(fā)育成熟,這種阻礙作用不可被脂多糖(LPS)所逆轉(zhuǎn)。MSCs對DCs誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖有抑制作用,空白對照組組CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的分裂比例分別為30.8%和33.4%,MSCs干預(yù)組CD4+T和CD8+T細(xì)胞的分裂比例分別為5.36%和3.94%。
　　結(jié)論：隨著供體年齡的增長,骨髓間充質(zhì)干