大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控肝星狀細(xì)胞凋亡的體內(nèi)研究.pdf

1、目的：經(jīng)尾靜脈移植骨髓間質(zhì)干細(xì)胞后，觀察肝星狀細(xì)胞活化及凋亡數(shù)量的變化情況，從體內(nèi)調(diào)控肝星狀細(xì)胞凋亡的角度出發(fā)，初步探討骨髓間質(zhì)干細(xì)胞治療肝纖維化的機(jī)制。
　　 材料與方法：利用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離出大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，并于體外培養(yǎng)擴(kuò)增。連續(xù)8周皮下注射CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化。將造模成功的20只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，每組10只；實(shí)驗(yàn)組按照1×106個(gè)細(xì)胞/kg經(jīng)尾靜脈注射骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)照組經(jīng)尾靜脈注射1ml

2、DMEM培養(yǎng)液。于移植前，移植后第3天，移植后第7天分別處死大鼠2、4、4只，取其肝臟進(jìn)行羥脯氨酸的檢測(cè)，病理切片行HE染色及massion染色檢測(cè)肝纖維化變化情況；免疫組化檢測(cè)α-SMA表達(dá)情況代表肝星狀細(xì)胞的活化情況，α-SMA與TUNEL(原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù))雙染檢測(cè)肝星狀細(xì)胞的凋亡情況，比較實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組之間的差別。
　　 結(jié)果：密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法能有效分離純化大鼠MSC。CCl4皮下注射8周后，病理切片顯示

3、肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞脂肪變性，間質(zhì)纖維組織增生，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，呈進(jìn)展性肝纖維化的表現(xiàn)；羥脯氨酸含量明顯升高，為0.2132±0.04μg/mg。MSC移植7天后，肝組織羥脯氨酸含量減少，為0.1270±0.0131μg/mg；病理顯示肝內(nèi)纖維組織沉積減少，肝細(xì)胞脂肪變性有所減輕，肝纖維化程度有所緩解，而對(duì)照組的肝纖維化程度繼續(xù)加重，羥脯氨酸含量增加為0.2327±0.0513μg/mg。免疫組化顯示，移植前及移植后第3天，α-SMA