骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在高脂飼料誘導(dǎo)肥胖大鼠體內(nèi)的遷移分化.pdf

1、第一部分： [目的]改進(jìn)大鼠前脂肪細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法 [材料與方法]體外培養(yǎng)大鼠前脂肪細(xì)胞，對(duì)Ng的膠原酶消化法進(jìn)行如下方面的改良：膠原酶消化的時(shí)間、離心的次數(shù)和轉(zhuǎn)數(shù)、過濾細(xì)胞的次數(shù)，分化培養(yǎng)后采用油紅O染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，通過形態(tài)學(xué)觀察、生長(zhǎng)曲線的繪制確定原代培養(yǎng)大鼠前脂肪細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)特征。 [結(jié)果]用改良后的方法獲得大量成份均一、生長(zhǎng)旺盛的前脂肪細(xì)胞，細(xì)胞活力測(cè)定90％為活細(xì)胞；前脂肪細(xì)胞5d左右進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)

2、期，8d左右達(dá)到平臺(tái)期；在分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下可以向脂肪細(xì)胞分化 [結(jié)論]實(shí)驗(yàn)成功地建立了前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)體系，較原方法更加有效。 第二部分：骨髓間質(zhì)干細(xì)胞在肥胖大鼠體內(nèi)的遷移分化 [目的]證實(shí)在高脂飼料的誘導(dǎo)下，骨髓間質(zhì)干細(xì)胞能向脂肪組織遷移定植并分化成脂肪細(xì)胞。 [材料與方法]將綠色熒光蛋白標(biāo)記的間質(zhì)干細(xì)胞按照2×106細(xì)胞/100g體重的劑量經(jīng)尾靜脈輸入剛斷乳（28 d）的33只雄性SD大鼠體內(nèi)，隨機(jī)分

3、為對(duì)照組（8只）和實(shí)驗(yàn)組（25只），分別給予普通飼料和高脂飼料。實(shí)驗(yàn)組高脂飼料的給予方法如下：先給予普通飼料喂養(yǎng)3d，然后按照含25％高脂飼料+75％普通飼料喂養(yǎng)2d，50％高脂飼料+50％普通飼料喂養(yǎng)2d的順序逐步過渡到75％高脂飼料+25％普通飼料喂養(yǎng)，以后全部給予含有75％高脂飼料+25％普通飼料的混合飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。分別于喂養(yǎng)后的第7、11周處死大鼠，取各部位脂肪組織，制成冰凍切片，進(jìn)行DAPI染色，采用免疫熒光的方法，在激光共聚

4、焦下進(jìn)行觀察，測(cè)定eGFP+細(xì)胞的特異性標(biāo)記：PPAR-γ，C/EBP-α，Perilipin，c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80。 [結(jié)果]高脂飼料喂養(yǎng)7周后30～40％的SD大鼠成為肥胖SD大鼠。在肥胖大鼠體內(nèi)脂肪組織中發(fā)現(xiàn)一定數(shù)量的eGFP+細(xì)胞，腎周脂肪組織和腸系膜脂肪組織最多。eGFP+細(xì)胞在顯微鏡下呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，單個(gè)細(xì)胞呈圓形，形態(tài)上為脂肪細(xì)胞。將eGFP+細(xì)胞分別進(jìn)行脂肪細(xì)胞特異性標(biāo)記（PPAR-γ，C/EBP-α，

5、perilipin）和巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)記（c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80）的免疫熒光檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示：eGFP+細(xì)胞的脂肪細(xì)胞特異性標(biāo)記檢測(cè)為陽(yáng)性，PPAR-γ和C/EBP-α在eGFP+細(xì)胞核上顯示為紅色的特異性熒光，perilipin在eGFP+細(xì)胞骨架上表現(xiàn)為紅色的特異性熒光；而eGFP+細(xì)胞的巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)記c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80的檢測(cè)結(jié)果為陰性。c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80均為巨噬細(xì)胞特異性膜表面蛋白