骨髓間質干細胞在高脂飼料誘導肥胖大鼠體內的遷移分化.pdf

1、第一部分： [目的]改進大鼠前脂肪細胞的原代培養(yǎng)方法 [材料與方法]體外培養(yǎng)大鼠前脂肪細胞，對Ng的膠原酶消化法進行如下方面的改良：膠原酶消化的時間、離心的次數(shù)和轉數(shù)、過濾細胞的次數(shù)，分化培養(yǎng)后采用油紅O染色對細胞進行鑒定，通過形態(tài)學觀察、生長曲線的繪制確定原代培養(yǎng)大鼠前脂肪細胞的細胞學特征。 [結果]用改良后的方法獲得大量成份均一、生長旺盛的前脂肪細胞，細胞活力測定90％為活細胞；前脂肪細胞5d左右進入指數(shù)增長

2、期，8d左右達到平臺期；在分化培養(yǎng)基的誘導下可以向脂肪細胞分化 [結論]實驗成功地建立了前脂肪細胞培養(yǎng)體系，較原方法更加有效。 第二部分：骨髓間質干細胞在肥胖大鼠體內的遷移分化 [目的]證實在高脂飼料的誘導下，骨髓間質干細胞能向脂肪組織遷移定植并分化成脂肪細胞。 [材料與方法]將綠色熒光蛋白標記的間質干細胞按照2×106細胞/100g體重的劑量經(jīng)尾靜脈輸入剛斷乳（28 d）的33只雄性SD大鼠體內，隨機分

3、為對照組（8只）和實驗組（25只），分別給予普通飼料和高脂飼料。實驗組高脂飼料的給予方法如下：先給予普通飼料喂養(yǎng)3d，然后按照含25％高脂飼料+75％普通飼料喂養(yǎng)2d，50％高脂飼料+50％普通飼料喂養(yǎng)2d的順序逐步過渡到75％高脂飼料+25％普通飼料喂養(yǎng)，以后全部給予含有75％高脂飼料+25％普通飼料的混合飼料進行喂養(yǎng)。分別于喂養(yǎng)后的第7、11周處死大鼠，取各部位脂肪組織，制成冰凍切片，進行DAPI染色，采用免疫熒光的方法，在激光共聚

4、焦下進行觀察，測定eGFP+細胞的特異性標記：PPAR-γ，C/EBP-α，Perilipin，c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80。 [結果]高脂飼料喂養(yǎng)7周后30～40％的SD大鼠成為肥胖SD大鼠。在肥胖大鼠體內脂肪組織中發(fā)現(xiàn)一定數(shù)量的eGFP+細胞，腎周脂肪組織和腸系膜脂肪組織最多。eGFP+細胞在顯微鏡下呈網(wǎng)狀結構，單個細胞呈圓形，形態(tài)上為脂肪細胞。將eGFP+細胞分別進行脂肪細胞特異性標記（PPAR-γ，C/EBP-α，

5、perilipin）和巨噬細胞特異性標記（c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80）的免疫熒光檢測，檢測結果顯示：eGFP+細胞的脂肪細胞特異性標記檢測為陽性，PPAR-γ和C/EBP-α在eGFP+細胞核上顯示為紅色的特異性熒光，perilipin在eGFP+細胞骨架上表現(xiàn)為紅色的特異性熒光；而eGFP+細胞的巨噬細胞特異性標記c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80的檢測結果為陰性。c-fms，CD11b，F(xiàn)4/80均為巨噬細胞特異性膜表面蛋白