miR-155-5p調(diào)控骨髓間質(zhì)干細(xì)胞向胃癌間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：闡明骨髓間質(zhì)干細(xì)胞（ BM-MSC）向胃癌間質(zhì)干細(xì)胞（GC-MSC）轉(zhuǎn)分化的分子調(diào)控機(jī)制，基于胃癌微環(huán)境探尋胃癌治療新靶標(biāo)。
　　方法：采用免疫熒光檢測(cè)α-SMA、FAP的表達(dá)，定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子的表達(dá)，Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的改變，應(yīng)用克隆形成實(shí)驗(yàn)和裸鼠皮下致瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞增殖能力的改變來確定BM-MSC與 GC-MSC表型和功能的差異。通過定量 PCR檢測(cè)比較 BM-MSC

2、與 GC-MSC中miR-155-5p表達(dá)的差異。運(yùn)用miR-155-5p micmis在GC-MSC中上調(diào)miR-155-5p的表達(dá)，miR-155-5p inhibitor在BM-MSC中下調(diào)miR-155-5p的表達(dá)，分析 MSC表型、功能的變化，確定miR-155-5p對(duì) BM-MSC向GC-MSC轉(zhuǎn)分化的調(diào)控作用。采用picTar和TargetScan軟件預(yù)測(cè)和熒光報(bào)告素酶基因檢測(cè)驗(yàn)證并確定miR-155-5p調(diào)控的靶基因。采

3、用靶基因干擾片段或抑制劑與miR-155-5p inhibitor共轉(zhuǎn)染BM-MSC，檢測(cè)其表型和功能的變化，闡明 miR-155-5p調(diào)控 BM-MSC向GC-MSC轉(zhuǎn)分化的分子機(jī)制。采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)彌散型、腸型胃癌組織標(biāo)本和胃炎標(biāo)本MSC中靶基因的表達(dá)，分析靶基因與胃癌分型的關(guān)系。從胃癌及癌旁組織中分離培養(yǎng)出 GC-MSC與GCN-MSC，Western blot檢測(cè)靶基因的表達(dá)差異。采用靶基因抑制劑或下游效應(yīng)分子干擾片

4、段處理GC-MSC，檢測(cè)其表型和功能的改變，闡明miR-155-5p調(diào)控的相關(guān)信號(hào)分子維持GC-MSC的表型和功能的作用及機(jī)制。
　　結(jié)果：GC-MSC與BM-MSC相比，具有更強(qiáng)的基質(zhì)細(xì)胞活化表型和促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的能力。miR-155-5p在GC-MSC中低表達(dá)，BM-MSC轉(zhuǎn)染miRNA-155-5p inhibitor后可獲得GC-MSC樣表型和功能，相反，運(yùn)用 miR-155-5p mimics上調(diào) GC-MSC中

5、miRNA-155-5p的表達(dá)可削弱其表型和對(duì)胃癌細(xì)胞的作用。NF-kappa B p65（NF-κB p65）和inhibitor of NF-kappa B kinase subunit epsilon（ IKBKE/IKKε）被預(yù)測(cè)并驗(yàn)證為 miR-155-5p的靶基因。使用si-NF-κB p65或 si-IKBKE作用于 BM-MSC可以抑制 miR-155-5p inhibitor對(duì)其轉(zhuǎn)分化的調(diào)控作用，這種作用也可以被NF-

6、κB p65活化抑制劑PDTC所抑制。IKBKE、NF-κB p65和phospho-NF-κB p65在彌散型胃癌組織MSC中的表達(dá)高于腸型胃癌組織MSC，陽性率分別為83.5％、80.8%和65.0%，而它們?cè)谖秆捉M織MSC中幾乎不表達(dá)，陽性率僅為19.3%,0%和4%。miR-155-5p在GC-MSC中表達(dá)下調(diào)，而NF-κB p65表達(dá)上調(diào)且活化增加，抑制NF-κB p65的活化或其下游關(guān)鍵效應(yīng)因子的表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)GC-MSC的表

7、型和功能。
　　結(jié)論：GC-MSC較BM-MSC具有更強(qiáng)的促癌表型、功能和低表達(dá)miR-155-5p。BM-MSC中miR-155-5p的低表達(dá)可上調(diào)IKBKE和NF-κB p65的表達(dá)并促進(jìn) NF-κB p65的活化，進(jìn)而促進(jìn)其獲得GC-MSC樣表型和功能，靶向抑制GC-MSC中NF-κB p65的活化或下游效應(yīng)因子的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)其促癌表型和功能。為 GC-MSC在胃癌微環(huán)境中的重塑提供了新的機(jī)制，也為胃癌的治療提供了有效靶點(diǎn)和治