巨噬細(xì)胞活化的間質(zhì)干細(xì)胞在胃癌發(fā)展中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:探究炎癥環(huán)境下，巨噬細(xì)胞對間質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的促炎作用及干細(xì)胞特性影響，并探討巨噬細(xì)胞活化的MSC對胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化作用及其機(jī)制，為探尋腫瘤環(huán)境細(xì)胞在慢性炎癥轉(zhuǎn)化腫瘤中的作用及機(jī)制提供新的依據(jù)。
　　方法:應(yīng)用液相芯片(Luminex)技術(shù)和qRT-PCR檢測炎癥環(huán)境下經(jīng)巨噬細(xì)胞活化的MSC分泌和表達(dá)炎癥因子的差異，采用Westernblot及qRT-PCR比較活化前后MSC中干性基因的改變。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)

2、及transwell遷移實(shí)驗(yàn)評價(jià)活化后的MSC分泌的上清對胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞生長和遷移能力的作用，Western blot檢測PCNA、VEGF及EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)，并采用qRT-PCR比較各組胃上皮細(xì)胞及胃癌細(xì)胞中VEGF、MMP9及TGF-β的表達(dá)差異。Western blot及qRT-PCR檢測不同MSC分泌上清對胃癌細(xì)胞干性基因表達(dá)的影響。Western blot檢測不同MSC上清作用后的胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞中NF-κB、E

3、RK1/2和STAT3的活化情況。采用PDTC抑制NF-κB活化，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和transwell遷移實(shí)驗(yàn)評估對胃癌細(xì)胞增殖和遷移的抑制效果。裸鼠皮下致瘤模型研究活化前后MSC對胃癌細(xì)胞致瘤能力的影響，免疫組化檢測瘤組織中PCNA和VEGF，qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及腫瘤干性基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:Luminex和qRT-PCR結(jié)果顯示炎癥刺激下巨噬細(xì)胞活化后的MSC炎癥因子表達(dá)明顯上調(diào)，且干性基因Oct4及Sox2

4、表達(dá)也有增強(qiáng)。該活化后的MSC分泌上清對胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞具有不同程度的促增殖、促遷移作用，并能引起轉(zhuǎn)移相關(guān)基因VEGF、MMP9及TGF-β表達(dá)的上調(diào)，且能增強(qiáng)胃癌細(xì)胞干性基因的表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示，其對胃上皮細(xì)胞和胃癌細(xì)胞的促增殖、促遷移作用與NF-κB、ERK1/2和STAT3的活化有關(guān)，且對胃癌細(xì)胞的促進(jìn)作用可被NF-κB抑制劑PDTC所抑制。裸鼠皮下致瘤實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)巨噬細(xì)胞活化后的MSC能增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的致瘤