自噬在巨噬細胞清除凋亡細胞中的作用.pdf

1、目的:研究巨噬細胞吞噬凋亡細胞后自噬結(jié)構(gòu)的形態(tài)學特征,探討自噬對于巨噬細胞清除凋亡細胞的作用,以及自噬與異噬的相互關(guān)系。
　　 方法:用環(huán)磷酰胺分別誘導淋巴細胞和Jurkat細胞凋亡。將凋亡的淋巴細胞和Jurkat細胞加入巨噬細胞培養(yǎng)皿,計算凋亡細胞清除率。通過Giesma染色和掃描電鏡觀察巨噬細胞吞噬凋亡細胞的表面結(jié)構(gòu)變化,透射電鏡下觀察巨噬細胞吞噬凋亡細胞后自噬前體、自噬體、自噬溶酶體和兩性體的分布和結(jié)構(gòu)特點,用圖像分析儀測

2、量自噬結(jié)構(gòu)與細胞質(zhì)的斷面面積,求出面積之比。用MDC染色法標記巨噬細胞的自噬體,在激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察和計數(shù)。用3-MA抑制巨噬細胞的自噬,觀察凋亡細胞被清除變化。
　　 結(jié)果:巨噬細胞活躍地吞噬凋亡細胞、凋亡細胞核、凋亡小體或其他細胞碎片,形成異噬體。與對照組比較,吞噬凋亡細胞組的巨噬細胞發(fā)生自噬的細胞增多,巨噬細胞內(nèi)自噬體數(shù)目增多,自噬前體、自噬體和自噬溶酶體與細胞質(zhì)的斷面面積之比增大。許多自噬體內(nèi)可見凋亡小體或其他細

3、胞碎片,這些自噬體的體積較大,多位于細胞膜下。亦可見內(nèi)含細胞質(zhì)樣物質(zhì)、損傷線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等的自噬體,多位于線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附近。未觀察到含有整個凋亡細胞或凋亡細胞核的自噬體。在部分細胞出現(xiàn)吞噬體和自噬體融合而成的兩性體。兩性體內(nèi)含凋亡細胞碎片和完整自噬體內(nèi)膜結(jié)構(gòu)。當巨噬細胞自噬受抑制時,凋亡細胞清除率降低。
　　 結(jié)論:巨噬細胞清除凋亡細胞時自噬功能顯著增強。自噬對于凋亡細胞的清除起著重要的直接和間接作用。在凋亡細胞清除時,自