骨髓間充質干細胞調控肝星狀細胞RhoA、p27的表達.pdf

1、目的：研究體外大鼠骨髓間充質干細胞(MSCs)對肝星狀細胞(HSCs)RhoA信號因子及其細胞周期調控因子p27表達的影響，探討MSCs調控HSCs細胞周期G1/S轉換機制。
　　 方法：貼壁篩選法培養(yǎng)、純化SD大鼠MSCs，傳代至第4代使用；大鼠肝星狀細胞(HSC-T6)系及纖維原細胞系凍融后傳代使用。應用6孔塑料細胞培養(yǎng)盒，每孔使用半透膜(transwell insert)建立上下雙層細胞共培養(yǎng)體系，常規(guī)培養(yǎng)。實驗分3組：空

2、白對照組；陰性對照組；MSCs實驗組.用WST-8法對肝星狀細胞增殖率進行測定；流式細胞儀檢測細胞周期；RT-PCR、Western blot檢測MSCs與HSCs共培養(yǎng)后HSCs內RhoA，p27 mRNA和蛋白的表達。
　　 結果：(1)HSCs與MSCs共培養(yǎng)24h后，HSCs表現(xiàn)明顯增殖抑制(P＜0.01)，且呈現(xiàn)時間依賴性.MSCs試驗組與空白對照組、陰性對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01；P＜0.01)。(2)共

3、培養(yǎng)12h后，MSCs可阻滯HSCs由G0/G1期向S期轉換，使G0/G1期細胞增多，S期細胞減少，與空白對照組、陰性對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。(3)共培養(yǎng)12h后，MSCs實驗組RhoA mRNA表達與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05；P＜0.01)，隨時間的延長呈遞減趨勢；共培養(yǎng)后，MSCs實驗組p27 mRNA表達與空白對照組、陰性對照組比較均無統(tǒng)計學差異。
　　 (4)共培養(yǎng)12

4、h后，MSCs實驗組RhoA蛋白表達與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01；P＜0.01)，隨時間的延長呈遞減趨勢；共培養(yǎng)12h后，MSCs實驗組p27蛋白與空白對照組、陰性對照組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01；P＜0.01)，隨時間的延長呈遞增趨勢。(5)相關性分析顯示：RhoA與p27 mRNA的表達無明顯相關(r=-0.105)；RhoA與p27蛋白的表達呈顯著負相關(r=-0.943，P＜0.01)。