桿狀病毒介導肝生長因子在骨髓間充質(zhì)干細胞中的調(diào)控表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立轉(zhuǎn)染高效可調(diào)控的攜帶肝生長因子(hepatocyte growth factor, HGF)為目的基因的重組桿狀病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并探尋其在轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)后的DOX誘導濃度、轉(zhuǎn)染后細胞形態(tài)和增殖速率的變化。
　　方法:采用全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)兔BM-MSCs,基因工程方法構(gòu)建重組桿狀病毒vAcrtTA2s

2、-Ptight-HGF,隨后轉(zhuǎn)染BM-MSCs,用ElISA和Western Blot檢測不同濃度強力霉素(doxycycline,DOX)誘導體外培養(yǎng)的兔BM-MSCs分泌的HGF的濃度,MTT方法檢測轉(zhuǎn)染后BM-MSCs的增殖變化。
　　結(jié)果:成功獲得兔BM-MSCs第5代細胞,成功構(gòu)建了高效可調(diào)控重組桿狀病毒載體vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并且成功轉(zhuǎn)染兔BM-MSCs,用系列濃度DOX誘導時ELISA和West

3、ern blot均檢測到BM-MSCs中HGF的表達有DOX誘導劑量依賴關(guān)系并且連續(xù)7天持續(xù)表達,且實驗組的HGF的表達量明顯高于對照組(P<0.001),轉(zhuǎn)染后的BM-MSCs仍然呈渦旋形生長,誘導產(chǎn)生序列濃度的HGF的BM-MSCs的增殖速度明顯高于空白對照組(P<0.001)。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建一次性轉(zhuǎn)染、高效可調(diào)控的重組桿狀病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并且實現(xiàn)對HGF表達的調(diào)控,當強力霉素誘導濃度為1

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