堿性成纖維細(xì)胞生長因子在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療小鼠肝硬化中的作用.pdf

1、干細(xì)胞移植治療肝硬化在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、臨床研究已被廣泛研究，堿性成纖維細(xì)胞生長因子體外條件下可以促進(jìn)干細(xì)胞增殖，利用bFGF培養(yǎng)后的干細(xì)胞治療肝硬化的體內(nèi)療效目前尚不確定。
　　目的：探索bFGF對(duì)BMSC生長和增殖的影響。加入0.1％bFGF培養(yǎng)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過小鼠尾靜脈注射后肝功能ALT、AST、ALB水平、組織病理學(xué)改變及膠原沉積變化情況。
　　方法：全骨髓貼壁法提取雄性SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；流式細(xì)胞檢測BMSC

2、。雌性昆明小鼠46只隨機(jī)分為分為5組：A組（CCl4+PBS)、B組（CCl4+bFGF）、C組（CCl4+bFGF-BMSC）、D組（CCl4+bFGF+BMSC）、E組（CCl4+bFGF+BMSC3次移植）。小鼠CCl4造模10周后分別尾靜脈注射bFGF+或bFGF-培養(yǎng)的BMSC，酶聯(lián)免疫法檢測肝功能，HE染色檢測組織病理學(xué)改變情況；Masson三色染色法檢測肝組織膠原沉積情況。
　　結(jié)果：（1）BMSC生長情況：觀察各組

3、傳代細(xì)胞的生長情況，bFGF-、bFGF+組細(xì)胞24h完全貼壁，貼壁細(xì)胞初期呈梭形或不規(guī)則形，細(xì)胞形態(tài)無明顯異常，主要以梭形為主，bFGF+組細(xì)胞增殖較快，于第4天鋪滿瓶底。bFGF-組較bFGF+細(xì)胞生長相對(duì)緩慢，第6-7天時(shí)基本完全鋪滿細(xì)胞培養(yǎng)瓶。（2）細(xì)胞生長：10ng/ml bFGF體外培養(yǎng)條件下，BMSC生長速率顯著高于無bFGF培養(yǎng)。（3）流式檢測：CD29、CD44陽性表達(dá)，CD45呈陰性表達(dá)。（4）化學(xué)法檢測肝臟功能：A

4、LT水平在模型對(duì)照組（A組）與B組比較無顯著性差異（P>0.05），C組、D組、E組ALT水平與A組、B組比較均有下降（兩兩比較具有顯著性差異，P<0.05）；ALT水平在D組、E組均較C組下降（P<0.05）；E組較D組下降（P<0.05）。AST水平在A組與B組間無顯著性差異（P>0.05）；C組、D組、E組兩兩之間無顯著性差異（P>0.05）；而C組、D組、E組較A組或B組具有明顯下降（P<0.05）。（5）HE染色結(jié)果：A組、B

5、組HE染色見肝細(xì)胞明顯水腫、脂肪變性、橋接壞死，肝索排列紊亂，假小葉廣泛形成。C組肝細(xì)胞水腫、脂肪變性，炎性細(xì)胞浸潤，但程度較模型組有所減輕，匯管區(qū)纖維沉積，可見假小葉結(jié)構(gòu)；D組、E組肝細(xì)胞水腫情況、炎性細(xì)胞浸潤程度較BMSC 組明顯改善，假小葉結(jié)構(gòu)可見，匯管區(qū)可見纖維沉積。（6）Masson結(jié)果顯示，A組、B組肝門脈區(qū)大量綠染纖維沉積，肝實(shí)質(zhì)內(nèi)綠色纖維浸潤，纖細(xì)的纖維間隔從匯管區(qū)延伸至肝實(shí)質(zhì)，分隔肝小葉形成假小葉。A組纖維面

6、積較B組無顯著性差異（P>0.05）；與A組、B組相比，C組、D組、E組纖維量減少，較A組、B組明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值均<0.05）；C組、D組匯管區(qū)、肝實(shí)質(zhì)有可見纖維沉積，但兩組纖維面積無顯著性差異（P>0.05）；E組較C組、D組面積均有顯著降低（P>0.05）。
　　結(jié)論：體外培養(yǎng)加入bFGF后BMSC生長速度較無bFGF時(shí)顯著提高，細(xì)胞形態(tài)大致相同，流式檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44、CD45表達(dá)與無bFG