低氧誘導因子-1a受體的小干擾RNA對人脊髓星形膠質(zhì)瘤細胞凋亡的影響.pdf

1、目的研究低氧誘導因子-lα(HIF-lα)受體的小干擾RNA對人星形膠質(zhì)瘤細胞(U251)凋亡的影響，小干擾RNA對HIF-lα的調(diào)控作用；探討腫瘤細胞凋亡的分子機制及調(diào)控。 方法構建靶向低氧誘導因子-lα(HIF-lα)受體的小干擾RNA(si RNA)真核表達載體pSUPER EGFPl。培養(yǎng)成熟的U25l細胞株隨機分成：①、載體(載體中轉染HIF-lα基因)缺氧組(U251在1％氧，無糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24

2、h和48h)；②、載體常氧組(U251在常氧，無糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；③、空載體(載體中未轉染HIF-lα基因)缺氧組(U251在1％氧，無糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；④、空載體常氧組(U25l在常氧，無糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；⑤、對照缺氧組(U25l在1％氧，無糖和血清的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)；⑥、對照常氧組(U251在常氧，無糖和血清

3、的培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)12h、24h和48h)。每一個樣品采用real time PCR測定HIF-lαmRNA表達水平；Western Blot和免疫組織化學測定：HIF-lα蛋白表達水平；光鏡和電鏡分別觀察細胞、細胞線粒體和足突改變；熒光顯微鏡觀察細胞熒光；MTT法測定細胞的生長。 結果①、載體缺氧組HIF-1α mRNA和蛋白表達水平較空載體缺氧組、對照缺氧組顯著降低(P均<0.05)，載體缺氧組HIF-1α mRNA和蛋白

4、表達隨著缺氧時間的延長而逐漸減少；②、空載體缺氧組、對照缺氧組24h HIF-1αmRNA和蛋白表達水平顯著高出常氧組(大約2倍多)。③、載體常氧組、空載體常氧組、對照常氧組HIF-lα mRNA和蛋白表達水平無顯著差異(P均>0.05)，④、載體缺氧組細胞線粒體和足突較空載體缺氧組、對照缺氧組明顯腫脹、凋亡細胞明顯增加。 結論①、腫瘤細胞在缺氧時HIF-1α基因表達增加，細胞凋亡減少。提示HIF-1α參與缺氧細胞的凋亡過程，