RNA干擾沉默NgR基因表達對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、粘附及凋亡的影響.pdf

1、本文從以下幾個方面進行論述。
　　第一部分 NgR在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達
　　目的：研究NgR在大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達。
　　方法：培養(yǎng)大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，以NgR兔抗鼠抗體標(biāo)記，常規(guī)免疫熒光染色，共聚焦熒光顯微鏡下觀察并拍照。
　　結(jié)果：通過免疫熒光檢測，NgR抗體標(biāo)記組C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)可見明顯熒光，無NgR抗體組未觀察到熒光。
　　結(jié)論：膠質(zhì)瘤中存在NgR的高表達，提示NgR可能參與腫瘤細(xì)胞的生長調(diào)控

2、。
　　第二部分 RNA干擾抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞NgR的表達
　　目的：建立shRNA，并檢測shRNA對膠質(zhì)瘤細(xì)胞中NgR表達的影響。
　　方法：將構(gòu)建成功的目的質(zhì)粒和亂序?qū)φ召|(zhì)粒在脂質(zhì)體Lipofectamine2000的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，72小時后分別用RT-PCR和Western Blot檢測NgR mRNA與蛋白質(zhì)的表達情況。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，目的質(zhì)粒組NgR mRNA表達量為亂序?qū)φ召|(zhì)粒組

3、的1/5，NgR蛋白表達量約為亂序?qū)φ召|(zhì)粒組的1/2。
　　結(jié)論：通過RNA干擾技術(shù)，可成功的干擾NgR在C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達。
　　第三部分 RNA干擾沉默NgR對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、粘附及凋亡的影響
　　目的：研究NgR基因表達沉默對大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲、粘附及凋亡的影響。
　　方法：轉(zhuǎn)染72小時后采用MTT檢測C6細(xì)胞增殖變化；通過Transwell侵襲實驗、粘附實驗、劃痕實驗分別檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞在

4、Nogo-66培養(yǎng)基中侵襲力、粘附力及遷移力的變化；分別采用流式細(xì)胞術(shù)（PI-Annexin V雙標(biāo)）、Western Blot、Tunel實驗檢測轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞自發(fā)凋亡率的變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染NgR-shRNA組C6細(xì)胞增殖率下降，自發(fā)凋亡率明顯增高，Nogo-66培養(yǎng)基中C6細(xì)胞侵襲力、粘附力及遷移力明顯增高。
　　結(jié)論：干擾NgR的表達可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖，促使凋亡增加，減弱Nogo-66介導(dǎo)的抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲力、