N-Myc基因活性對膠質(zhì)瘤干細胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的: 檢測膠質(zhì)瘤干細胞中N-Myc基因的表達，探討N-Myc基因?qū)δz質(zhì)瘤干細胞增殖、凋亡的影響。
　　 方法:
　　 （1）膠質(zhì)瘤干細胞的分離和培養(yǎng)：用免疫磁珠分選法分選出高純度的CD133+細胞,培養(yǎng)膠質(zhì)瘤干細胞。實驗分四組：空白對照、脂質(zhì)體對照、siRNA陰性對照、siRNA組。
　　 （2）提取細胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄后進行PCR擴增, 檢測CD133-細胞和CD133+細胞中N-Myc mRNA的表達。提取

2、細胞總蛋白，Western Blot檢測CD133-細胞和CD133+細胞中N-Myc蛋白的含量。
　　 （3）根據(jù)體外合成siRNA的設(shè)計原則，合成N-Myc siRNA。
　　 （4）陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將N-Myc siRNA轉(zhuǎn)染CD133+細胞。RT-PCR、Western Blot分別檢測轉(zhuǎn)染后 CD133+細胞內(nèi)N-Myc mRNA水平和蛋白含量。
　　 （5）MTT法檢測轉(zhuǎn)染后CD133+細胞增殖，流

3、式細胞術(shù)檢測CD133+細胞周期，流式細胞術(shù)檢測CD133+細胞凋亡。
　　 結(jié)果: CD133-膠質(zhì)瘤細胞中的N-Myc mRNA和蛋白水平較低，而CD133+膠質(zhì)瘤細胞中的N-Myc mRNA和蛋白水平較高。轉(zhuǎn)染N-Myc siRNA后，與對照組相比，siRNA組CD133+細胞中的N-Myc mRNA和蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05）。MTT法檢測顯示：與對照組相比，siRNA組CD133+細胞增殖明顯

4、受抑制，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05）。流式細胞術(shù)檢測細胞周期顯示：與對照組相比，siRNA組G0/G1期CD133+細胞的百分數(shù)明顯增高，S期CD133+細胞的百分數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05）。流式細胞術(shù)檢測細胞調(diào)亡顯示：與對照組相比，siRNA組CD133+細胞凋亡率明增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0. 05）。
　　 結(jié)論: N-Myc在膠質(zhì)瘤CD133+細胞中高表達，抑制N-Myc表達可以阻礙膠質(zhì)瘤干