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文檔簡介
1、目的:檢測Rak在正常腦組織及膠質(zhì)瘤組織中的表達;探討Rak對膠質(zhì)瘤U251細胞凋亡及增殖能力的影響。
方法:
①用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)檢測Rak在正常腦組織及不同惡性程度腦膠質(zhì)瘤中的表達情況。
②通過Lipofectamine2000將pcDNA3.0-Rak質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到膠質(zhì)瘤U251細胞。實驗分為空載體對照組(轉(zhuǎn)染pcDNA3.0)和Rak過表達組(轉(zhuǎn)染pcDNA3.0-Rak
2、)。
③運用細胞免疫熒光、RT-PCR、蛋白免疫印跡等方法鑒定外源性的Rak在細胞中的表達情況。④分別以流式細胞術(shù)和MTT比色法檢測Rak對細胞凋亡率及增殖能力的影響。
結(jié)果:
①RT-PCR結(jié)果顯示,與正常腦組織相比,Rak在膠質(zhì)瘤組織中呈低表達(P＜0.05)。
②細胞免疫熒光檢測顯示,轉(zhuǎn)染細胞48 h后,Rak轉(zhuǎn)染率達到70％左右;與空載體對照組相比,過表達組細胞Rak基因m
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