Mocsin在人腦形細胞瘤中的表達和意義及其對U251細胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、第一章 Moesin在人腦星形細胞瘤的表達及意義。
　　 目的：探討膜結(jié)構伸展刺突蛋白(Moesin)在人腦星形細胞瘤中的表達及意義。
　　 方法：應用免疫組織化學SP方法，檢測56例人腦星形細胞瘤和10例正常腦組織中Moesin和Phospho-Moesin的表達，應用RT-PCR測定15例新鮮人腦星形細胞瘤和2例正常腦組織中Moesin的mRNA，并結(jié)合臨床隨訪資料分析表達水平與星形細胞瘤臨床預后的相關性。
　

2、　 結(jié)果：Moesin的陽性表達率在人腦星形細胞瘤組96.4％(54/56)和正常腦組織對照組0％(0/10)之間有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。Ⅰ-Ⅳ級星形細胞瘤中Moeisn的強陽性表達隨腫瘤分級上升而增高(x2=33.93，P<0.01)，Phospho-Moesin的表達結(jié)果與Moesin的結(jié)果基本一致。RT-PCR檢測正常腦組織，Ⅰ-Ⅱ級星形細胞瘤，和Ⅲ-Ⅳ級星形細胞瘤3組之間Moesin的mRNA表達依次增高，表達水平之間有

3、統(tǒng)計學差異(F=66.133，Sig=0.000)。結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn)Moesin的強陽性表達和星形細胞瘤分化之間有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。Moesin強陽性表達組患者比弱陽性+陰性表達組患者的術后無瘤生存時間短，其差異有統(tǒng)計學意義(x2=29.85，P=0.000)。
　　 結(jié)論：Moesin的表達水平與人腦星形細胞瘤的惡性程度密切相關，Moesin的過度表達對星形細胞瘤發(fā)展和預后起重要作用，提示Moesin可以作為

4、反映星形細胞瘤預后的一種有價值的分子標志物。
　　 第二章 siRNA干擾下調(diào)Moesin表達對U251細胞生長和侵襲能力的影響。
　　 目的：本研究旨在探討RNA干擾(RNA interference，RNAi)對人腦膠質(zhì)細胞瘤(U251)中Moesin蛋白基因表達的抑制作用及其對U251細胞生長、侵襲的影響。
　　 方法：以人腦膠質(zhì)細胞瘤U251細胞系為研究對象，針對Moesin編碼基因設計小于擾RNA(si

5、RNA)片段，轉(zhuǎn)染入細胞，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)篩選沉默效率最高的siRNA片段，并用Western Blot技術定量轉(zhuǎn)染后U251細胞的Moesin蛋白的表達水平。轉(zhuǎn)染后以MTT法檢測增殖能力，流式細胞術檢測細胞的凋亡水平，Transwell法檢測侵襲能力的變化，并以掃描電鏡觀察轉(zhuǎn)染后的細胞形態(tài)變化。
　　 結(jié)果：RT-PCR和Western-blot篩選出MOESIN-139片段沉默效果最好，siRNA轉(zhuǎn)染后

6、U251細胞生長速度減慢，在轉(zhuǎn)染48h時，siRNA組的U251細胞明顯生長速度低于空白組和陰性對照組(P<0.01)，同時凋亡率上升，siRNA組平均凋亡率為(17.30±2.01)％，遠高于空白組平均凋亡率1(1.95±0.33)％，陰性組平均凋亡率(2.02±0.28)％(P<0.01)。siRNA轉(zhuǎn)染后的U251細胞穿過聚碳酯膜的細胞數(shù)量也明顯減少，由空白組26.47±4.07和陰性組的24.27±3.63減少到轉(zhuǎn)染組的11.5

7、3±2.61(P<0.01)。細胞形態(tài)發(fā)生改變，細胞表面?zhèn)巫銛?shù)由空白組的14.2±2.58，陰性組的15.8±1.30下降至轉(zhuǎn)染組的6.6±1.82(P<0.01)。
　　 結(jié)論：siRNA下調(diào)Moesin的表達能有效抑制U251細胞的生長，減低其侵襲性；Moesin有可能成為治療人腦膠質(zhì)瘤的靶點分子。
　　 第三章 siRNA干擾下調(diào)Moesin表達導致U251細胞生長侵襲能力下降與PDGF和CD44關系的研究。

8、>　　 背景與目的：本研究旨在探討Moeisn蛋白參與影響人腦膠質(zhì)細胞瘤(U251)生長和侵襲可能途徑。
　　 方法：以人腦膠質(zhì)細胞瘤U251細胞系為研究對象，針對Moesin編碼基因設計小干擾RNA片段轉(zhuǎn)染入細胞，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)篩選沉默效率最高的siRNA片段進行后續(xù)實驗。通過對設計的3組不同干預的U251細胞(空白組，陰性對照組，轉(zhuǎn)染組)進行RT-PCR測定PDGF的表達，以及流式細胞方法測定CD4

9、4的量。
　　 結(jié)果：RT-PCR發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組U251細胞中PDGF的mRNA的平均表達為0.09377±0.008546，遠低于空白組0.4663±0.01844和陰性對照組0.4570±0.02159，其差異有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.01)；流式檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組中CD44的表達最低26.73±2.720％與其他2組差異明顯(F=173.669，sig=0.000)。
　　 結(jié)論：U251細胞中Moesin表達下降將導致P