MicroRNA-195對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251耐藥株的作用.pdf

1、目的:觀察miR-195在人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞及其耐藥株中的表達(dá)情況，初步探討miR-195在膠質(zhì)瘤耐藥形成及逆轉(zhuǎn)中的作用機(jī)制。
　　 方法:采用替莫唑胺(TMZ)濃度遞增的作用方式進(jìn)行誘導(dǎo)，初始誘導(dǎo)劑量TMZ0.25μg/mL，最高誘導(dǎo)劑量為20μg/mL，獲得穩(wěn)定的對TMZ耐藥的U251細(xì)胞，命名為U251R或耐藥組細(xì)胞，用CCK-8法檢測U251，U251R的細(xì)胞增殖抑制率，計算半數(shù)抑制濃度IC50，耐藥指數(shù)(RF);q

2、RT-PCR技術(shù)檢測U251和U251R細(xì)胞中miR-195的表達(dá)情況;用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法將miR-195-mimics轉(zhuǎn)入U251R，稱為轉(zhuǎn)染組細(xì)胞，熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染效率，qRT-PCR技術(shù)檢測耐藥組，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中miR-195的表達(dá)情況;CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增殖抑制率，計算IC50，RF;流式細(xì)胞儀檢測耐藥組，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率。實驗所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS19.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。多組

3、間均數(shù)比較使用單因素方差分析，各組間兩兩比較使用LSD-t檢驗。IC50用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包的Probit過程求解。P＜0.05定為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)果:
　　 1、歷經(jīng)6個月成功建立了對TMZ耐藥的U251R，U251R細(xì)胞IC50(310.86μM)是未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞IC50(32.46μM)的9.58倍(P＜0.05)，其耐藥指數(shù)(RF)約為10;
　　 2、qRT-PCR顯示耐藥株U25

4、1R中miR-195相對表達(dá)量低于U251(P＜0.05)，轉(zhuǎn)染組中miR-195相對表達(dá)量高于耐藥組(P＜0.05);
　　 3、轉(zhuǎn)染組miR-195-mimics的轉(zhuǎn)染效率在90％以上;
　　 4、轉(zhuǎn)染組細(xì)胞IC50(162.97μM)是未經(jīng)誘導(dǎo)U251細(xì)胞IC50(32.46μM)的5.02倍(P＜0.05)，其耐藥指數(shù)(RF)約為5;
　　 5、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組較耐藥組細(xì)胞凋亡率增多(P＜0.0