HCMV感染致人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞株miRNA表達改變的初步研究.pdf

1、目的:篩選人巨細胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞差異表達的miRNA，為進一步研究HCMV的致畸機制提供基礎。
　　 方法:用HCMV(MOI=5)感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細胞株，感染后24h，48h，72h收獲細胞作為為實驗組，以模擬感染的正常細胞為對照組。用miRNA表達譜芯片技術檢測細胞的miRNA表達水平，應用軟件篩選并獲得一些差異表達明顯的miRNA，再利用Taqman

2、探針或SYBR綠色熒光染料Ⅰ(SYBRGREENⅠ)實時定量PCR驗證芯片結果，應用生物信息學軟件預測miRNA的靶基因，并篩選出與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關的靶基因。
　　 結果:與模擬感染的細胞相比，24h.p.i，48h.p.i，72h.p.i實驗組中有33個細胞miRNA表達顯著差異，其中19個表達上調(diào)均超過2倍，有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p

3、等;14個表達下調(diào)超過2倍，有hsa-miR-634，hsa-miR-129-3p，hsa-miR-340*，hsa-miR-769-5p等。實時定量PCR驗證結果顯示:與芯片結果基本一致，hsa-miR-381，hsa-miR-622，hsa-miR-27b，hsa-miR-296-3p表達上調(diào)，hsa-miR-634表達顯著下調(diào)，可初步作為其特異基因。生物信息學結果表明:hsa-miR-381與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育相關的靶基因有10個，如R

4、OM1、SIAH1、JAK2等;hsa-miR-622的靶基因有4個，分別是BTK、PHOX2B、AQP8和PAX; hsa-miR-27b的靶基因有40個，如SYT-1、HOXB8、OTX2等;hsa-miR-296-3p的靶基因有7個，如GPR143、NOG、HOXB6等;hsa-miR-634的靶基因有4個，分別是NOTCH3、TYR、ACVR1和CELSR3;其他差異表達miRNA的靶基因還有NEROD1、AQP4、NRP2、S