Bim介導(dǎo)FOXO3a對U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡作用的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 觀察沉默Bim 表達(dá)對重新激活FOXO3a 的U251 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響及凋亡相關(guān)蛋白Bim、caspase3 的變化，探究FOXO3a 對人腦膠質(zhì)瘤U251 細(xì)胞凋亡影響的作用機(jī)制，為膠質(zhì)瘤基因治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1. pcDNA3.1-FOXO3a 真核表達(dá)載體經(jīng)Nco Ⅰ、Hind Ⅲ酶切后鑒定。
　　 2. U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)、傳代。
　　 3. U251/

2、FOXO3a 細(xì)胞被隨機(jī)分為四組：對照組，脂質(zhì)體組，siRNA 陰性對照組及實(shí)驗(yàn)組；實(shí)驗(yàn)組采用陽離子脂質(zhì)體法將Bim siRNA轉(zhuǎn)染入經(jīng)4-OH Tamoxifen 誘導(dǎo)的U251/FOXO3a 細(xì)胞，分別于轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h 收集細(xì)胞，Western blot 檢測FOXO3a、Bim、caspase3 的表達(dá)，Hoechst33258染色試劑盒及流式細(xì)胞儀（Fluorescein Activated Cell Sor

3、ter，F(xiàn)ACS）檢測細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:
　　 1. pcDNA3.1-FOXO3a 真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染U251 細(xì)胞，經(jīng)G418 篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)非磷酸化型FOXO3a 的U251/FOXO3a 細(xì)胞株。
　　 2. Western blot 檢測結(jié)果顯示：Bim siRNA 轉(zhuǎn)染4-OH Tamoxifen 誘導(dǎo)的U251/FOXO3a 細(xì)胞后24 h、48 h、72 h，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組FOXO

4、3a 表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Bim、caspase3 表達(dá)水平較低（P＜0.05），至48 h 蛋白表達(dá)水平達(dá)最低。
　　 3.Hoechst33258 染色及FACS 檢測細(xì)胞凋亡率顯示：Bim siRNA 轉(zhuǎn)染FOXO3a/U251細(xì)胞后24 h、48 h、72 h，細(xì)胞凋亡率均低于對照組（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組各時間點(diǎn)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1. 獲得穩(wěn)定表達(dá)非磷酸化型F