塞來昔布對U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響及分子機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 探討塞來昔布(Celecoxib)對體外培養(yǎng)的人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)的增殖影響,以及塞來昔布不同濃度對核因子(NF-κB)在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的分布的影響,進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制
　　 方法:
　　 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)分別在用藥組(分別以含Cele濃度0、10、25、50、100umol/1的培養(yǎng)液作用)和聯(lián)合用藥組(用藥組中加入了腫瘤壞死因子FNF-α50ng/ml)中體外培養(yǎng)24h。應(yīng)用

2、甲基噻唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞增殖的影響,用MaxVisionTM免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察NF-κB(p65)蛋白在塞來昔布和TNF-α對細(xì)胞刺激后在U251細(xì)胞的亞細(xì)胞分布,用western blot檢測細(xì)胞核內(nèi)NF-κB(p65)蛋白在細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 甲基噻唑藍(lán)(MTT)法結(jié)果顯示,不同濃度的塞來昔布(Celecoxib)對細(xì)胞生長均有一定的抑制作用,且Celecoxib對細(xì)胞的抑制作用呈劑量依賴性,

3、而與TNF-α的聯(lián)合作用并沒有協(xié)同效應(yīng)(P>0.05)。
　　 免疫細(xì)胞化學(xué)示:靜息狀態(tài)下的U251細(xì)胞內(nèi)的NF-κB(p65)蛋白核內(nèi)外都有分布。而用50ng/m; TNF-α刺激U251細(xì)胞30分后,細(xì)胞內(nèi)的p65蛋白明顯從細(xì)胞漿向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移。而用塞來昔布預(yù)處理1h后聯(lián)合TNF-α作用于U251細(xì)胞,可以明顯的抑制NF-κ B(p65)的細(xì)胞核移位。并且不同濃度的塞來昔布作用細(xì)胞,通過western blot檢測其p65蛋白