塞來昔布與茶多酚合用對乳腺癌細胞增殖及凋亡的影響和機制.pdf

1、目的:
　　研究塞來昔布與茶多酚合用對乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖及凋亡的影響，并初步探討兩藥合用誘導(dǎo)細胞凋亡的作用機制。
　　方法:
　　MTT比色法檢測塞來昔布與茶多酚單用及合用對細胞的增殖抑制作用。倒置相差顯微鏡觀察對細胞形態(tài)學(xué)的影響。Hoechst33258熒光染色觀察細胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。流式細胞術(shù)AnnexinⅤ-FITC/PI雙染檢測細胞凋亡率。Real-timePCR檢測Bcl-2和Bax的mRNA

2、的表達。Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9的表達。
　　結(jié)果:
　　1.MTT結(jié)果顯示，塞來昔布與茶多酚單用均能顯著抑制乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖（P＜0.05）。最小有效量的塞來昔布（10μmol/L）與不同濃度的茶多酚(6.25、12.5、25、50、100μg/mL)合用對細胞的增殖抑制率高于各單藥組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3、　　2.倒置相差顯微鏡下觀察，塞來昔布（10μmol/L）與茶多酚(50、100μg/mL)單藥組及合用組均出現(xiàn)了細胞皺縮，折光性變差，細胞碎片增多的現(xiàn)象，且合用組與各單藥組比較，正常細胞數(shù)明顯減少，形態(tài)學(xué)改變更加明顯。
　　3.Hoechst33258熒光染色后，塞來昔布(10μmol/L)與茶多酚(50、100μg/mL)單藥組及合用組均出現(xiàn)了細胞核皺縮，染色質(zhì)凝聚的典型凋亡形態(tài)學(xué)特征，且合用組與各單藥組比較，凋亡形態(tài)學(xué)變化更

4、加顯著。
　　4.流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，塞來昔布（10μmol/L）與茶多酚（50、100μg/mL）單用及合用均能誘導(dǎo)細胞凋亡，且兩藥合用的凋亡率顯著高于各單藥組。
　　5.Real-time PCR結(jié)果顯示塞來昔布(10μmol/L)和茶多酚(100μg/mL)能使抑凋亡基因Bcl-2的mRNA的表達降低，促凋亡基因Bax的mRNA的表達升高，且兩藥合用能起到協(xié)同作用。
　　6.Western Blot結(jié)果表明塞來昔

5、布（10μmol/L）和茶多酚(100μg/mL)單用及合用均能顯著降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表達，提高促凋亡蛋白Bax的表達，并使凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、caspase-9的活化形式cleaved caspase-3、cleavedcaspase-9表達增高，且聯(lián)合用藥組與各單藥組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.塞來昔布與茶多酚單用及合用均能抑制乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖，且