乳腺癌細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)microRNA的篩選.pdf

1、腫瘤是難以治愈的疾病。目前對(duì)腫瘤的治療主要是通過(guò)外科手術(shù)切除，以及放療或化療等方法，但目前尚無(wú)法根治。乳腺癌是一種女性常見(jiàn)的腫瘤，在惡性腫瘤女性患者中，乳腺癌的發(fā)病率高居第一。目前已有越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)癌基因在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用，它們可能調(diào)控著癌細(xì)胞的增殖、遷移或凋亡。微小RNA(microRNA)是一類(lèi)單鏈小分子非編碼RNA，長(zhǎng)度約22個(gè)核苷酸，廣泛存在于真核生物中，主要通過(guò)與靶mRNA3'非翻譯區(qū)完全或部分互補(bǔ)結(jié)

2、合，導(dǎo)致靶mRNA降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。鑒定能夠?qū)θ橄侔╆P(guān)鍵癌基因起調(diào)控作用的microRNA，對(duì)乳腺癌的治療有著重要的作用。
　　 本研究以人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7為研究系統(tǒng)，利用慢病毒(lentivirus)介導(dǎo)的真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)過(guò)表達(dá)特定miRNA，檢測(cè)對(duì)MCF-7細(xì)胞系的增殖具有抑制作用的microRNA。實(shí)驗(yàn)主要分為4個(gè)部分:
　　 1.在miRanda、miRDB、PicTar和Targ

3、etScan4個(gè)microRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件上分別進(jìn)行了靶預(yù)測(cè)，選擇靶基因中富集了參與調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞生長(zhǎng)的miRNA。最后找到miR-124、miR-181a-1、miR-211、miR-302a、miR-302b、miR-302c及miR-367這7個(gè)microRNA作為候選microRNA。
　　 2.根據(jù)miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)中的人microRNA前體序列，合成互補(bǔ)的兩條序列片段，將兩條鏈退火后，酶聯(lián)到pLVX-shR