膠質(zhì)瘤中腦腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因、microRNA表達(dá)及RNA干擾研究.pdf

1、研究背景:
　　 膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)惡性腫瘤,傳統(tǒng)治療主要包括腫瘤手術(shù)切除和放化療,但由于腫瘤侵襲性極強,術(shù)后復(fù)發(fā)率極高。腦腫瘤干細(xì)胞理論的提出讓我們認(rèn)識到要治愈腫瘤,避免復(fù)發(fā),可能需要針對腦腫瘤干細(xì)胞,這為進(jìn)一步推動新型的分子水平的靶向藥物治療提供了方向。
　　 目前認(rèn)為腦腫瘤干細(xì)胞可能起源于發(fā)生基因突變的神經(jīng)干細(xì)胞,所以與干細(xì)胞緊密相關(guān)的Hedgehog(HH)信號通路在腦腫瘤干細(xì)胞的增殖和分化過程中也可能

2、發(fā)揮了重要作用。近年來,microRNA是腫瘤研究領(lǐng)域的一個熱點,有研究表明microRNA在腦腫瘤干細(xì)胞的自我更新和分化中具有一定的調(diào)控作用,有些microRNA通過負(fù)性調(diào)節(jié)來影響人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的重要基因的表達(dá)。因此,了解膠質(zhì)瘤中腦腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因、microRNA表達(dá)及干預(yù)作用和機(jī)制對于膠質(zhì)瘤的治療很有研究意義。
　　 目的:
　　 分選并鑒定膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的腦腫瘤干細(xì)胞,明確HH信號通路活化的標(biāo)志物Glil及M

3、iR-210在腦腫瘤干細(xì)胞增殖、分化過程中及正常腦組織中的表達(dá)豐度。研究Glil siRNA轉(zhuǎn)染對HH信號通路活性、MiR-210表達(dá)、細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲能力的影響。
　　 方法:
　　 原代培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87-MG,對膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫磁珠分選(MACS),將分選后得到的細(xì)胞培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基中,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測CD133+表達(dá)和移植裸鼠致瘤實驗對腦腫瘤干細(xì)胞特性加以鑒定。對不同病理分級的膠質(zhì)瘤、

4、腦腫瘤干細(xì)胞應(yīng)用實時定量熒光PCR的方法檢測Glil及MiR-210的表達(dá)豐度。應(yīng)用Glil siRNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞后用實時定量熒光PCR、Western Blot等方法檢測轉(zhuǎn)染后對Glil、MiR-210表達(dá)、細(xì)胞增殖狀態(tài)、凋亡及侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 (1)MACS方法可有效從膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分選出CD133+腦腫瘤干細(xì)胞。
　　 (2)腦腫瘤干細(xì)胞Glil高表達(dá),Glil表達(dá)與病理分級無明確相關(guān)

5、性。
　　 (3)腦腫瘤干細(xì)胞MiR-210高表達(dá),MiR-210表達(dá)與病理分級無明顯相關(guān)。
　　 (4)Glil-siRNA可有效抑制HH信號通路,但不影響MiR-210表達(dá)。
　　 (5)Glil-siRNA抑制HH信號通路使膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長受到抑制。
　　 (6)Glil-siRNA抑制HH信號通路使膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡增加。
　　 (7)Glil-siRNA抑制HH信號通路使膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力

6、減弱。
　　 結(jié)論:
　　 MACS方法可有效從膠質(zhì)瘤細(xì)胞中分選出CD133+細(xì)胞,此亞群細(xì)胞表現(xiàn)出腦腫瘤干細(xì)胞特性。膠質(zhì)瘤細(xì)胞包括原代培養(yǎng)細(xì)胞和U87-MG細(xì)胞中腦腫瘤干細(xì)胞都顯示Glil mRNA的高表達(dá)。但Glil的表達(dá)情況與病理分級沒有明確的相關(guān)性。膠質(zhì)瘤細(xì)胞包括原代培養(yǎng)細(xì)胞和U87-MG細(xì)胞中腦腫瘤干細(xì)胞都顯示MiR-210的高表達(dá),但MiR-210的表達(dá)與病理分級無明顯相關(guān)性。Glil-siRNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)