過(guò)表達(dá)Mfn2抑制缺血缺氧-再灌注引起的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖.pdf

1、目的：腦梗死晚期形成的致密膠質(zhì)瘢痕是神經(jīng)元修復(fù)及軸突再生的重要危險(xiǎn)因子。線粒體融合蛋白2（Mfn2）亦被稱為增值抑制基因蛋白，具有在體內(nèi)外抑制增殖通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞周期進(jìn)展，從而拮抗細(xì)胞增值促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)探討在體外無(wú)糖無(wú)血清/再灌注（OGD/R）模型中Mfn2在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為缺血缺氧/再灌注0h組、缺血缺氧/再灌注6h組、缺血缺氧/再灌注12h組和缺血缺氧/再灌注24h組；在缺血缺氧/再灌注

2、12h純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞分為 Adv-Mfn2組 Adv-GFP組和對(duì)照組。Western-blot檢測(cè) GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA、CyclinD1及 Mfn2等蛋白的變化情況；流式細(xì)胞儀PI單標(biāo)法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞周期進(jìn)展情況；Edu免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞活化增殖能力的變化；RT-PCR檢測(cè)Mfn2基因RNA變化情況。
　　結(jié)果：星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)缺血缺氧/再灌注刺激后 GFAP表達(dá)持續(xù)上升；Ras-Raf1

3、-ERK1/2通路蛋白、CyclinD1及PCNA表達(dá)增高，并于OGD/R12h達(dá)到高峰，之后呈下降趨勢(shì)；星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)活化增殖后 G0/G1期比率進(jìn)行性下降并于OGD/R12h達(dá)到最低值，S期及G2/M期細(xì)胞數(shù)持續(xù)性增加，并于OGD/R12h達(dá)到高峰；mfn2蛋白及 RNA變化趨勢(shì)一致并與上述蛋白表達(dá)結(jié)果相反。較Adv-GFP組及對(duì)照組，高表達(dá)mfn2組星形膠質(zhì)細(xì)胞的GFAP、Ras-Raf1-ERK1/2、PCNA及 CyclinD

4、1蛋白表達(dá)顯著下降，細(xì)胞周期及增殖活力顯著受到抑制，而mfn2蛋白及RNA均增高。
　　結(jié)論：星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)無(wú)糖無(wú)血清/再灌注刺激后 Ras-Raf1-ERK1/2信號(hào)通路激活、細(xì)胞周期活化進(jìn)展，mfn2蛋白及基因表達(dá)均受到抑制，從而促使星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖；高表達(dá)mfn2通過(guò)抑制Ras-Raf1-ERK1/2通路磷酸化及阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期進(jìn)而抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖從而防止膠質(zhì)瘢痕形成。Mfn2可望作為細(xì)胞增殖性疾病防治的新靶點(diǎn)