減少大鼠腎缺血再灌注損傷的方法對(duì)比研究.pdf

1、目的：
　　本研究將通過夾閉SD大鼠腎動(dòng)脈制造腎臟缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）模型，在再灌注前后使用缺血后處理（ischemic postconditioning，IPostC）、遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理（remote ischemic preconditioning，RIPC）、肌苷注射液及HC-A腎保護(hù)液灌注處理等方法，缺血再灌注24小時(shí)、48小時(shí)、1周后檢測(cè)大鼠下腔靜脈血中尿素氮（B

2、UN）及血清肌酐（Cr）的含量。通過組織病理學(xué)評(píng)價(jià)腎小管損傷程度，并檢測(cè)腎組織中髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的活性以評(píng)估組織過氧化損傷的程度，綜合比較這幾種處理方法對(duì)腎IRI的保護(hù)作用。
　　方法：
　　選用成年健康雌性SD大鼠，體重約220±30g，隨機(jī)分假手術(shù)組（Sham組）

3、、IR組、RIPC組、IPostC組、肌苷注射液處理組（肌苷組）和HC-A腎保護(hù)液灌注組（HC-A組）。各組SD大鼠開腹切除右側(cè)腎臟，夾閉左腎動(dòng)脈45分鐘后恢復(fù)灌注，觀察腎動(dòng)脈搏動(dòng)及腎臟顏色變化，腎動(dòng)脈恢復(fù)搏動(dòng)，腎臟顏色由暗紅轉(zhuǎn)變紅潤(rùn)，表示灌注成功。經(jīng)過上述處理干預(yù)后再灌注24小時(shí)、48小時(shí)及1周，分別抽取大鼠下腔靜脈血，用于檢測(cè)血清Cr和BUN評(píng)估腎功能。切除左腎，取部分腎組織用液氮低溫處理后轉(zhuǎn)入冰箱中-80℃下保存，用于檢測(cè)腎組織M

4、DA、SOD及MPO酶活性。另部分腎組織放入4％多聚甲醛溶液中固定，用于蘇木精-伊紅（HE）染色制片。在光學(xué)顯微鏡下，按照Paller評(píng)分方法，每張玻片選5個(gè)不同的視野，每個(gè)視野隨機(jī)選擇10個(gè)腎小管，用評(píng)估腎小管上皮細(xì)胞損傷程度。數(shù)據(jù)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x?s）表示，采用單因素方差分析比較組間差異，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、腎功能評(píng)價(jià)
　　再灌注24小時(shí)和48小時(shí)后，

5、IR組、PostC組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較，血清中Cr顯著升高（p<0.05）；再灌注24小時(shí)后，PostC組、RIPC組、肌苷組及HC-A組與IR組比較，血清Cr顯著降低（p<0.05）；IPostC組和RIPC組與HC-A組比較，血清Cr降低（p<0.05）；再灌注48小時(shí)后，IPostC組、RIPC組、肌苷組與IR組及HC-A組比較，血清Cr降低（p<0.05）；1周后，IPostC組、RIPC組、肌苷組

6、和HC-A組的血清Cr仍低于IR組（p<0.05），與Sham組無明顯差異。再灌注24小時(shí)后IR組和HC-A組血清BUN與Sham組比較明顯升高（p<0.05）；PostC組、RIPC組、肌苷組及HC-A組與IR組比較，血清BUN降低（p<0.05）；PostC組和RIPC組較HC-A組血清BUN降低（p<0.05）。再灌注48小時(shí)后，IR組和IPostC組血清BUN與Sham組比較升高（p<0.05），IPostC組、RIPC組和肌苷

7、組與IR組比較，血清BUN水平降低（p<0.05）。
　　2、腎組織病理觀察
　　Sham組大鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯異常，IR組中再灌注24小時(shí)、48小時(shí)后腎組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷，腎小管上皮細(xì)胞變性壞死，管腔擴(kuò)張，內(nèi)可見大量壞死細(xì)胞；再灌注1周后腎組織中可見輕度局灶性炎癥和點(diǎn)狀壞死。IPostC組、RIPC組、肌苷組和HC-A組再灌注24小時(shí)和48小時(shí)后和IR組比較發(fā)現(xiàn)腎組織損傷減輕，腎小管上皮細(xì)胞水腫減輕，官腔輕中度擴(kuò)張，腔

8、內(nèi)可見少許炎性細(xì)胞聚集。再灌注1周后腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，部分可見腎小管輕度水腫；
　　3、腎組織MPO活性變化
　　再灌注24小時(shí)后，IR組、IPostC組、RIPC組、HC-A組與Sham組比較，腎組織中MPO活性顯著升高（p<0.05）；再灌注48小時(shí)后，IR組、RIPC組、肌苷組和HC-A組與Sham組比較，腎組織中MPO活性升高（p<0.05）；灌注24小時(shí)和48小時(shí)后，IPostC組、RIPC組和肌苷組與IR組

9、對(duì)比，腎組織MPO的活性顯著降低（p<0.05）；
　　4、腎組織MDA活性變化
　　再灌注24小時(shí)和48小時(shí)后，IR組、IPostC組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較，腎組織中MDA活性顯著升高（p<0.05）；再灌注24小時(shí)后，IPostC組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與IR組比較，腎組織中MDA活性顯著降低（p<0.05）；IPostC組和RIPC組與HC-A組對(duì)比，MDA活性降低（p<0.05）；

10、再灌注48小時(shí)后，IPostC組、RIPC組和肌苷組與IR組比較，MDA活性降低（p<0.05）。
　　5、腎組織SOD活性變化
　　再灌注24小時(shí)和48小時(shí)后，IR組、IPostC組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較，腎組織中SOD活性明顯降低（p<0.05）；IPostC組、RIPC組、肌苷組和HC-A組腎組織中SOD活性與IR組對(duì)比則增高了（p<0.05）；再灌注1周后，HC-A組與Sham組比較，SOD

11、活性降低（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　IRI腎病理表現(xiàn)為腎組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能異常，Cr和BUN升高，MDA、MPO活性升高，SOD活性下降；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IPostC、HC-A腎保護(hù)液、RIPC及肌苷注射液處理等對(duì)IRI腎具有保護(hù)作用；其可通過降低MDA和MPO酶活性，提高SOD酶清除氧自由基能力等抗氧化機(jī)制，而達(dá)到保護(hù)腎功能作用。研究表明RIPC對(duì)IRI腎有保護(hù)作用，且和IPostC、肌苷注射液處理比較無明顯差異，較