RPM對大鼠腎缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的： 探討雷帕霉素(RPM)對大鼠腎缺血再灌注損傷的療效及機制。揭示RPM對大鼠腎缺血再灌注損傷的作用機制并尋求治療腎缺血再灌注損傷的有效途徑。 方法： 第一部分：從生化檢測和細胞形態(tài)學(xué)水平，觀測RPM對腎缺血再灌注大鼠腎的功能和超微結(jié)構(gòu)的影響。 30只雄性Wistar大鼠隨機分為3組：假手術(shù)(sham)組(切除右腎，分離左腎動脈，不阻斷血流，灌胃給等量生理鹽水)、手術(shù)(IR)組(切除右腎，分離左腎動脈

2、，阻斷血流，缺血前灌胃給等量生理鹽水)、藥物(RPM+IR)組(切除右腎，分離左腎動脈，阻斷血流，缺血前灌胃給藥雷帕霉素(4m/(Kg·d)×3d，最后一次術(shù)前2 h灌胃)。大鼠急性缺血性腎損傷模型為切除右腎，分離左腎動脈，阻斷血流45 min，再灌注24 h，觀察腎功能和腎組織超微結(jié)構(gòu)改變。 第二部分：從基因蛋白表達水平，觀測RPM對腎缺血再灌注大鼠腎的凋亡基因蛋白表達的影響。 Wistar大鼠81只，隨機分為三組：假

3、手術(shù)組(切除右腎，分離左腎動脈，不阻斷血流，缺血前灌胃給等量生理鹽水)、手術(shù)組(切除右腎，分離左腎動脈，阻斷血流，缺血前灌胃給等量生理鹽水)、藥物組(切除右腎，分離左腎動脈，阻斷血流，缺血前灌胃給藥雷帕霉素(4mg/(Kg.d)×3d，術(shù)日術(shù)前2h灌胃)，術(shù)后給藥至各個觀察日)，缺血組又按缺血再灌注時間分為再灌注后O h，24 h.48h,72 h，4個觀察時相，每個觀察組相9只。采用HE染色分析腎組織病理損傷程度，TUNEL法檢測腎組

4、織細胞凋亡率，免疫組化SABC法檢測Fas，bcl-2蛋白表達的變化。 結(jié)果： 第一部分：腎缺血再灌注組血肌酐(168±37)μmol/L、血尿素氮(22±6)mmol/L，雷帕霉素組血肌酐(113±17)μmol/L、血尿素氮(13.8±2.3)mmol/L；2組比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。電鏡：手術(shù)組腎小管管腔被大量壞死脫落細胞碎片堵塞，上皮細胞胞漿內(nèi)脂滴堆積，細胞發(fā)生凋亡跡象；藥物組腎小管超微結(jié)構(gòu)損害輕微

5、。 第二部分：手術(shù)組腎組織細胞凋亡率顯著升高(P＜0.05)；藥物組比手術(shù)組細胞凋亡率顯著降低(P＜0.05)。 Fas蛋白在假手術(shù)組呈陰性表達，手術(shù)組再灌注0 h有少量表達，再灌注24，48及72 h呈陽性表達，以48 h時達高峰(P＜0.05)；主要表達在皮質(zhì)腎小管；藥物組腎組織Fas蛋白水平顯著低于手術(shù)組(P＜0.05)。bcl-2蛋白在假手術(shù)組呈陰性表達，手術(shù)組再灌注Oh有少量表達，再灌注24，48及72 h呈陽性表達，

6、48 h達高峰(P＜0.05)；皮質(zhì)腎小管表達為主；藥物組腎組織bcl-2蛋白水平顯著高于手術(shù)組(P＜0.05)。HE染色可見手術(shù)組腎小管上皮細胞有不同程度的片狀壞死灶和炎性細胞浸潤，藥物組腎組織損傷明顯減輕。 結(jié)論： 第一部分：RPM對大鼠腎缺血再灌注損傷時腎功能和腎組織超微結(jié)構(gòu)有明顯保護作用。 第二部分：RPM對大鼠腎缺血再灌注損傷所致的腎損害具有顯著的保護作用，該作用可能與RPM下調(diào)Fas，上調(diào)bcl-2蛋