骨骼肌缺血再灌注繼發(fā)腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)損傷是指缺血組織、器官恢復(fù)血液灌注后不但不能使其功能和結(jié)構(gòu)恢復(fù),反而加重其功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷的現(xiàn)象,是外科臨床中一種常見的嚴(yán)重并發(fā)癥。這種損傷并不僅僅出現(xiàn)在缺血再灌注的局部,還可通過氧自由基釋放、中性粒細(xì)胞激活及炎性細(xì)胞因子釋放等機(jī)制累及遠(yuǎn)隔重要臟器。臨床上肢體創(chuàng)傷、斷肢再植、止血帶應(yīng)用不當(dāng)、筋膜間隙綜合征、動(dòng)脈栓塞等引起的肢體再灌注損傷較為常見,由此繼發(fā)的腎臟損傷與相應(yīng)功能障

2、礙,臨床過程復(fù)雜,患者死亡率相對(duì)較高。骨骼肌缺血再灌注損傷的機(jī)制由于有許多因素的介入而變的十分復(fù)雜,目前主要以氧自由基學(xué)說,鈣超載學(xué)說和中性粒細(xì)胞學(xué)說為主,同時(shí)也注意到了一氧化氮和細(xì)胞凋亡以及微循環(huán)的無復(fù)流現(xiàn)象在其中的作用；而肢體缺血再灌注繼發(fā)腎損傷,其發(fā)生機(jī)制也較復(fù)雜。既往認(rèn)為,腎小管內(nèi)形成肌紅蛋白管型造成腎小管堵塞是腎損傷的主要發(fā)病機(jī)制:人體骨骼肌內(nèi)含有大量肌紅蛋白,當(dāng)骨骼肌有損傷時(shí),肌紅蛋白便釋放入血中,肌紅蛋白能自由地經(jīng)。腎小球

3、濾過,通過胞吞作用進(jìn)入腎小管上皮細(xì)胞并被代謝,但當(dāng)肌紅蛋白過多時(shí)就會(huì)形成肌紅蛋白管型,從而阻塞腎小管。而近期研究認(rèn)為來源于肌紅蛋白的亞鐵血紅素在腎小管損傷中起重要作用,除形成管型外,更重要的是血紅素可誘發(fā)OH-自由基形成,引起腎小管上皮氧化損傷。正常骨骼肌細(xì)胞內(nèi)含豐富的乳酸脫氫酶(LDH),細(xì)胞損傷早期,肌膜通透性增高,細(xì)胞中的LDH釋放入血,血清中的LDH即發(fā)生相應(yīng)改變,隨著肢體損傷程度的加重,釋放入血的LDH進(jìn)一步增加。因而血清中L

4、DH的含量可作為骨骼肌細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo),其含量的高低可反映骨骼肌細(xì)胞損傷的程度。肌酐(Cr)是小分子物質(zhì),可通過腎小球?yàn)V過,在腎小管內(nèi)很少吸收,因此血清Cr濃度主要取決于腎小球?yàn)V過功能,臨床上檢測(cè)血清Cr是常用的了解腎功能的主要方法之一,血清Cr能較準(zhǔn)確的反應(yīng)腎實(shí)質(zhì)受損的情況。
　　 目的:通過分析假手術(shù)組、單純?nèi)毖M、缺血再灌注組相應(yīng)血清LDH、Cr水平在骨骼肌缺血再灌注損傷及繼發(fā)腎損傷中的變化特點(diǎn),觀察腎組織HE染色后組織

5、病理改變,從而進(jìn)一步探討骨骼肌缺血再灌注繼發(fā)腎損傷的病理生理機(jī)制,尋求新的有效的治療方法。
　　 方法:健康雄性SD大鼠30只,體重250±20g,隨機(jī)分為3組,A組:假手術(shù)組,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10只,以3％戊巴比妥鈉(3mg/100g)腹腔注射麻醉,僅單純游離腹主動(dòng)脈,不阻斷,4h后處理。B組:缺血4h組,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10只,以3％戊巴比妥鈉(3mg/100g)麻醉,將麻醉好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于實(shí)驗(yàn)板上,剪毛消毒后,取腹部正中切口進(jìn)腹,推開小腸

6、,剪開后腹膜,游離腹主動(dòng)脈,在腎動(dòng)脈水平下端以Bulldog鉗阻斷腹主動(dòng)脈,確認(rèn)阻斷血流后全層縫合腹壁,建立骨骼肌缺血模型,4h后立即處理。C組:缺血4h再灌注4h組:建立骨骼肌缺血模型同B組,阻斷腹主動(dòng)脈4h后再次打開腹腔,松開Bulldog鉗,再灌注4h后處理。按分組要求時(shí)間點(diǎn)心臟采血,觀察血清LDH和肌酐Cr的變化情況,同時(shí)用鋒利刀片取新鮮腎臟組織,做石蠟切片采用HE染色,觀察組織形態(tài)的改變。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)材料采用SPSS17.

7、0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:骨骼肌細(xì)胞受到損傷時(shí),細(xì)胞膜的通透性增高,正常情況下位于細(xì)胞內(nèi)的LDH釋放到細(xì)胞外進(jìn)入血液循環(huán),因此測(cè)定血中LDH含量的變化,可以反映出骨骼肌細(xì)胞受損的程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:單純?nèi)毖MB組與假手術(shù)組A組比較,血清中LDH含量無明顯改變,而缺血再灌注組C組血清中LDH含量則明顯高于單純?nèi)毖MB組,差異有顯著性,說明C組骨骼肌細(xì)胞膜通透性增加,損傷程度比較重。血清肌酐能較準(zhǔn)確的反應(yīng)腎實(shí)質(zhì)損傷的情況

8、,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:單純?nèi)毖狟組與假手術(shù)A組比較,血清中Cr含量無明顯改變,而缺血再灌注C組血清中Cr含量則明顯高于單純?nèi)毖狟組,差異有顯著性,說明C組腎實(shí)質(zhì)損傷程度明顯高于B組。腎組織光鏡下觀察結(jié)果:假手術(shù)組腎小球形態(tài)正常,腎小管排列整齊,腎小管上皮、腎血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常,胞漿均勻、紅染,胞核無變形,核仁清晰,無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；單純?nèi)毖M較假手術(shù)組無明顯差別；缺血再灌注組腎小管上皮細(xì)胞腫脹明顯,腎小管管腔狹窄,部分腎小管上皮完整性破壞。