不同缺血預(yù)調(diào)適方案對(duì)大鼠肢體骨骼肌缺血再灌注損傷影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究3個(gè)不同缺血預(yù)調(diào)適方案對(duì)大鼠肢體骨骼肌缺血再灌注損傷模型的影響，通過對(duì)骨骼肌組織學(xué)光鏡觀察和超微結(jié)構(gòu)觀察，測(cè)定骨骼肌濕/干比值、血清乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性，檢測(cè)骨骼肌壞死程度，比較3種不同缺血預(yù)調(diào)適方案對(duì)肢體缺血再灌注損傷保護(hù)效果的差異，從中篩選出最優(yōu)方案，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:使用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉大鼠右側(cè)后肢股動(dòng)脈，再灌注時(shí)松開動(dòng)脈夾，建立肢體缺血再灌注損傷模型。健康成年雄性SD大鼠4

2、8只，隨機(jī)分為缺血再灌注組（缺血組）、缺血預(yù)調(diào)適A、B、C組共4組（n=12/組），缺血再灌注組為單純?nèi)毖俟嘧⒔M，于夾閉股動(dòng)脈4小時(shí)后，恢復(fù)灌注。缺血預(yù)調(diào)適A組采用夾閉股動(dòng)脈2分鐘，開夾2分鐘，依此循環(huán)6次，再夾閉股動(dòng)脈缺血4小時(shí)，后恢復(fù)灌注。缺血預(yù)調(diào)適B組采用夾閉股動(dòng)脈5分鐘，開夾5分鐘，依此循環(huán)3次，再夾閉股動(dòng)脈缺血4小時(shí)，后恢復(fù)灌注。缺血預(yù)調(diào)適C組采用夾閉股動(dòng)脈1分鐘，開夾1分鐘，依此循環(huán)10次，再缺血4小時(shí)，后恢復(fù)灌注。缺血組

3、和缺血預(yù)調(diào)適組分別于再灌注后2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)時(shí)間點(diǎn)取股靜脈血和左、右后肢小腿肌組織，并處死大鼠。股靜脈血離心，取血清用ELISA法測(cè)定LDH和CK活性變化。取右后肢小腿比目魚肌，用H&E染色觀察骨骼肌炎癥、水腫和壞死等病理學(xué)改變，用醋酸鈾-檸檬酸鉛染色，通過透射電鏡觀察骨骼肌超微結(jié)構(gòu)改變。取左（自身空白對(duì)照）、右后肢腓腸肌稱取濕重，干燥后稱取干重，計(jì)算濕干重比。切取右后肢脛前肌，用TTC染色，觀察肌肉顏色變化并用SCION I

4、MAGE圖像軟件計(jì)算壞死面積百分比，對(duì)比各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果:缺血組再灌注后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)（2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)）的CK值和LDH值均高于預(yù)調(diào)適組(P＜0.05);再灌注后2小時(shí)，預(yù)調(diào)適A組的CK值和LDH值低于B、C組(P＜0.05)，預(yù)調(diào)適B組的CK值和LDH值低于C組(P＜0.05);再灌注后12小時(shí)，預(yù)調(diào)適A組的CK值和LDH值與B組無顯著差異(P＞0.05)，預(yù)調(diào)適A組的CK值和LDH值均低于C組，再灌注24小時(shí)，

5、預(yù)調(diào)適B組的CK值和LDH值均低于A、C組(P＜0.05)，預(yù)調(diào)適A組的CK值和LDH值低于C組(P＜0.05)。濕/干重比:缺血組再灌注后24小時(shí)濕干重比值最大，預(yù)調(diào)適A組再灌注后2小時(shí)比值最小，缺血組不同時(shí)間點(diǎn)的比值均大于預(yù)調(diào)適組(P＜0.05)，再灌注12小時(shí)內(nèi)預(yù)調(diào)適A組的比值均小于B、C組(P＜0.05)，預(yù)調(diào)適B組的比值低于C組(P＜0.05);再灌注后12-24小時(shí)內(nèi)，預(yù)調(diào)適B組的比值低于A、C組(P＜0.05)，預(yù)調(diào)適A組

6、的比值優(yōu)于C組(P＜0.05)。TTC染色結(jié)果:缺血組壞死面積比均高于預(yù)調(diào)適三組，再灌注后12-24小時(shí)內(nèi)，預(yù)調(diào)適B組的壞死面積最少。HE染色示缺血組再灌注24小時(shí)可見肌原纖維變性扭曲中度水腫，橫紋結(jié)構(gòu)紊亂，部分區(qū)域核固縮消失，血管充血，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)預(yù)調(diào)適A組、預(yù)調(diào)適B組、預(yù)調(diào)適C組24小時(shí)骨骼肌損傷情況均輕于缺血組，其中以預(yù)調(diào)適A組、預(yù)調(diào)適B組骨骼肌損傷最少。電鏡觀察示缺血組再灌注24小時(shí)肌原纖維重度水腫、排列紊亂，肌絲溶解斷裂，糖

7、元顆粒減少，線粒體腫脹，肌質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。再灌注24小時(shí)，預(yù)調(diào)適A組、預(yù)調(diào)適B組、預(yù)調(diào)適C組肌原纖維排列紊亂、橫紋結(jié)構(gòu)破壞、線粒體腫脹、肌質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張均明顯輕于缺血組，其中以預(yù)調(diào)適B組超微結(jié)構(gòu)改變最少。
　　結(jié)論:缺血預(yù)調(diào)適能減輕肢體缺血再灌注損傷，通過降低血漿中的CK、LDH含量，減少骨骼肌壞死面積，減輕損傷程度，從而起到保護(hù)作用。三種缺血預(yù)調(diào)適方案的保護(hù)效果具有差異性，且缺血預(yù)調(diào)適的保護(hù)具有時(shí)間限制。綜合分析，以3個(gè)循環(huán)5分鐘缺血/5分