幼兔股骨頭缺血再灌注損傷與細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)建立幼兔股骨頭缺血再灌注損傷模型，用光鏡、透射電鏡和原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)等檢測(cè)方法觀察缺血再灌注損傷對(duì)幼兔股骨頭的影響，初步探討缺血再灌注損傷與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，為進(jìn)一步研究股骨頭缺血再灌注損傷的機(jī)制和尋找有效的防治措施提供理論基礎(chǔ)。 方法：(1)參照YokotaJ的方法采用髂總動(dòng)脈阻斷-開(kāi)放法建立幼兔股骨頭缺血再灌注模型。一月齡左右健康新西蘭兔32只，體重1.0±0.25kg，雌雄不限。正常組2只，

2、其余隨機(jī)分為三組，分別代表缺血再灌注4、8、12小時(shí)組，每組10只兔。每組再隨機(jī)分成5個(gè)小組，分別代表各大組內(nèi)的缺血組和再灌注4、24、72、168小時(shí)組。實(shí)驗(yàn)中均以幼兔的左側(cè)股骨頭為實(shí)驗(yàn)側(cè)。仔細(xì)分離髂總動(dòng)脈，在兩側(cè)髂總動(dòng)脈分叉處以下用無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉左側(cè)髂總動(dòng)脈，髂總靜脈不阻斷。觀察實(shí)驗(yàn)側(cè)足趾末梢毛細(xì)血管充盈情況，記錄缺血和再灌注時(shí)間。到達(dá)各實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)后處死動(dòng)物取標(biāo)本。(2)制做石蠟切片、應(yīng)用HE染色觀察缺血和再灌注后幼兔股骨頭的病理組

3、織學(xué)結(jié)構(gòu)改變。(3)應(yīng)用透射電鏡觀察幼兔股骨頭缺血和再灌注后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。(4)應(yīng)用原位末端標(biāo)記技術(shù)觀察缺血和再灌注后幼兔股骨頭細(xì)胞在分子生物學(xué)水平上的組織學(xué)改變。 結(jié)果：(1)阻斷髂總動(dòng)脈血運(yùn)后實(shí)驗(yàn)側(cè)足趾末梢毛細(xì)血管充盈時(shí)間較對(duì)側(cè)明顯延長(zhǎng)，患肢皮膚溫度降低；松開(kāi)血管夾后毛細(xì)血管充盈時(shí)間逐漸恢復(fù)，皮膚溫度逐漸恢復(fù)。(2)HE染色鏡下缺血再灌注4小時(shí)組幼兔股骨頭組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞損傷以核腫脹為主；缺血再灌注8小時(shí)組形

4、態(tài)結(jié)構(gòu)部分紊亂，細(xì)胞損傷以核固縮為主，細(xì)胞陷窩加深，少量細(xì)胞溶解消失；缺血再灌注12小時(shí)組形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞損傷以核固縮為主，細(xì)胞陷窩加深，少量細(xì)胞溶解消失。(3)透射電鏡下缺血8小時(shí)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為：細(xì)胞皺縮，表面突起消失，核輕度固縮，核膜凹陷，染色質(zhì)不均等；再灌注72小時(shí)表現(xiàn)為：細(xì)胞皺縮，陷窩加深，核固縮，核內(nèi)染色質(zhì)濃聚、邊集于核膜下呈塊狀、環(huán)狀或新月?tīng)?；再灌?68小時(shí)表現(xiàn)為：細(xì)胞皺縮，陷窩加深，核膜完整或部分缺失，核內(nèi)染色質(zhì)濃

5、聚、邊集于核膜下呈八字狀、環(huán)狀或新月?tīng)睿斯炭s、碎裂。(4)TUNEL染色顯示有凋亡特征的細(xì)胞呈棕黃色，其陽(yáng)性信號(hào)核內(nèi)分布，核邊界清楚，大小不一，周圍無(wú)炎癥性反應(yīng)，部分細(xì)胞胞漿也有著色。缺血可造成幼兔股骨頭少量細(xì)胞凋亡。各再灌注組和對(duì)照組之間比較，其細(xì)胞凋亡率升高p＜0.05。在一定時(shí)限內(nèi)，缺血時(shí)間越長(zhǎng)，再灌注后陽(yáng)性染色的細(xì)胞越多。同一缺血時(shí)間下隨再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，陽(yáng)性染色細(xì)胞增多，其細(xì)胞凋亡率呈逐漸上升的趨勢(shì)。 結(jié)論：(1)采