幼兔股骨頭缺血再灌注損傷與細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過建立幼兔股骨頭缺血再灌注損傷模型，用光鏡、透射電鏡和原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)等檢測方法觀察缺血再灌注損傷對幼兔股骨頭的影響，初步探討缺血再灌注損傷與細胞凋亡之間的關(guān)系，為進一步研究股骨頭缺血再灌注損傷的機制和尋找有效的防治措施提供理論基礎(chǔ)。 方法：(1)參照YokotaJ的方法采用髂總動脈阻斷-開放法建立幼兔股骨頭缺血再灌注模型。一月齡左右健康新西蘭兔32只，體重1.0±0.25kg，雌雄不限。正常組2只，

2、其余隨機分為三組，分別代表缺血再灌注4、8、12小時組，每組10只兔。每組再隨機分成5個小組，分別代表各大組內(nèi)的缺血組和再灌注4、24、72、168小時組。實驗中均以幼兔的左側(cè)股骨頭為實驗側(cè)。仔細分離髂總動脈，在兩側(cè)髂總動脈分叉處以下用無創(chuàng)血管夾夾閉左側(cè)髂總動脈，髂總靜脈不阻斷。觀察實驗側(cè)足趾末梢毛細血管充盈情況，記錄缺血和再灌注時間。到達各實驗時間點后處死動物取標(biāo)本。(2)制做石蠟切片、應(yīng)用HE染色觀察缺血和再灌注后幼兔股骨頭的病理組

3、織學(xué)結(jié)構(gòu)改變。(3)應(yīng)用透射電鏡觀察幼兔股骨頭缺血和再灌注后細胞超微結(jié)構(gòu)的改變。(4)應(yīng)用原位末端標(biāo)記技術(shù)觀察缺血和再灌注后幼兔股骨頭細胞在分子生物學(xué)水平上的組織學(xué)改變。 結(jié)果：(1)阻斷髂總動脈血運后實驗側(cè)足趾末梢毛細血管充盈時間較對側(cè)明顯延長，患肢皮膚溫度降低；松開血管夾后毛細血管充盈時間逐漸恢復(fù)，皮膚溫度逐漸恢復(fù)。(2)HE染色鏡下缺血再灌注4小時組幼兔股骨頭組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，細胞損傷以核腫脹為主；缺血再灌注8小時組形

4、態(tài)結(jié)構(gòu)部分紊亂，細胞損傷以核固縮為主，細胞陷窩加深，少量細胞溶解消失；缺血再灌注12小時組形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂，細胞損傷以核固縮為主，細胞陷窩加深，少量細胞溶解消失。(3)透射電鏡下缺血8小時細胞超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為：細胞皺縮，表面突起消失，核輕度固縮，核膜凹陷，染色質(zhì)不均等；再灌注72小時表現(xiàn)為：細胞皺縮，陷窩加深，核固縮，核內(nèi)染色質(zhì)濃聚、邊集于核膜下呈塊狀、環(huán)狀或新月狀；再灌注168小時表現(xiàn)為：細胞皺縮，陷窩加深，核膜完整或部分缺失，核內(nèi)染色質(zhì)濃

5、聚、邊集于核膜下呈八字狀、環(huán)狀或新月狀，核固縮、碎裂。(4)TUNEL染色顯示有凋亡特征的細胞呈棕黃色，其陽性信號核內(nèi)分布，核邊界清楚，大小不一，周圍無炎癥性反應(yīng)，部分細胞胞漿也有著色。缺血可造成幼兔股骨頭少量細胞凋亡。各再灌注組和對照組之間比較，其細胞凋亡率升高p＜0.05。在一定時限內(nèi)，缺血時間越長，再灌注后陽性染色的細胞越多。同一缺血時間下隨再灌注時間的延長，陽性染色細胞增多，其細胞凋亡率呈逐漸上升的趨勢。 結(jié)論：(1)采