糖皮質(zhì)激素致幼兔股骨頭缺血壞死的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　檢測(cè)R-spondin1、DKK-1、β-catenin在幼兔激素性股骨頭缺血壞死動(dòng)物模型股骨頭組織中的表達(dá)，比較不同劑量甲基潑尼松龍對(duì)人成骨細(xì)胞中R-spondin1的表達(dá)及人成骨細(xì)胞凋亡的影響，探討糖皮質(zhì)激素致幼兔股骨頭缺血壞死的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　1.幼兔股骨頭壞死組（n=12）：激素性股骨頭缺血壞死新西蘭幼兔；對(duì)照組（n=12）：正常新西蘭幼兔。應(yīng)用Western Blot、RT-qPCR檢

2、測(cè)方法檢測(cè)R-spondin1、DKK-1、β-catenin在各組股骨頭中的表達(dá)情況，比較各相關(guān)蛋白及基因在各組中的表達(dá)差異，皮爾遜（Pearson）相關(guān)性檢驗(yàn)分析R-spondin1與DKK-1、β-catenin的相關(guān)性。
　　2.培養(yǎng)人成骨細(xì)胞并傳代，激素干預(yù)組：分別加入(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)甲基潑尼松龍后，繼續(xù)培養(yǎng)72h；空白組：不加甲基潑尼松龍，繼續(xù)培養(yǎng)72h。Western B

3、lot、RT-qPCR檢測(cè)各組R-spondin1的表達(dá)情況，同期檢測(cè)各組的細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.R-spondin1在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的蛋白表達(dá)量分別為0.179±0.028、0.471±0.104，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.38，P<0.01）；β-catenin在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的蛋白表達(dá)量分別為0.195±0.041、0.632±0.129，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.15，P<0

4、.01）；Dkk1在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的蛋白表達(dá)量分別為0.713±0.161、0.181±0.029，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-11.25，P<0.01）；在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中，R-spondin1與β-catenin的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.89,P<0.01），R-spondin1與Dkk1呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.945,P<0.05）。
　　2.R-spondin1在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的mRN

5、A表達(dá)量分別為0.255±0.039、0.995±0.093，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=25.33,P<0.01）；β-catenin在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的mRNA表達(dá)量分別為0.216±0.036、1.055±0.083，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=32.49，P<0.01）；Dkk1在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中的mRNA表達(dá)量分別為3.275±0.073、0.986±0.084，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-10.32，P<0.01）

6、；在幼兔股骨頭壞死組與對(duì)照組中，R-spondin1與β-catenin的表達(dá)mRNA呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.860,P<0.01），R-spondin1與Dkk1呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.945, P<0.01）。
　　3.空白組與10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L三種不同劑量甲基潑尼松龍干預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞中R-spondin1蛋白表達(dá)量分別為0.622±0.105、0.441±0.125、0.194±0.038

7、、0.112±0.019，R-spondin1蛋白表達(dá)量隨甲基潑尼松龍劑量增大而降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=76.37,P<0.01）；R-spondin1mRNA表達(dá)量分別為0.999±0.168，0.897±0.131，0.624±0.101，0.323±0.033，R-spondin1mRNA表達(dá)量隨甲基潑尼松龍劑量增大而降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=64.79,P<0.01）。
　　4.空白組與10-8mol/L組、10

8、-7mol/L組、10-6mol/L組的細(xì)胞凋亡率（％）分別為7.41±1.11、13.14±1.92、25.01±5.21、31.99±9.48，細(xì)胞凋亡率隨干預(yù)劑量增大而增大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=40.80,P<0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.糖皮質(zhì)激素對(duì)人成骨細(xì)胞中R-spondin1的表達(dá)具有負(fù)調(diào)控作用，可能通過(guò)負(fù)調(diào)控R-spondin1表達(dá)促進(jìn)人成骨細(xì)胞的凋亡。
　　2.在糖皮質(zhì)激素致幼兔股骨頭缺血壞死