糖皮質(zhì)激素對(duì)大鼠激素性壞死股骨頭內(nèi)主要成骨調(diào)控基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)Wistar大鼠股骨頭壞死模型,研究調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化和成熟關(guān)鍵基因Runx2(runt-related transcription factor-2)、Osterix及AJ18在不同時(shí)期激素性壞死股骨頭組織中的表達(dá)及蛋白質(zhì)合成的變化情況,分析其在股骨頭壞死發(fā)病、進(jìn)展過(guò)程中的作用,為研究激素性股骨頭壞死的發(fā)病機(jī)制提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：按20mg/kg劑量交替經(jīng)大鼠雙側(cè)臀大肌注射地塞米松,

2、每周一次；注射地塞米松后放在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物跑臺(tái)上每周兩次訓(xùn)練,共8周,誘導(dǎo)大鼠激素性股骨頭壞死動(dòng)物模型。HE染色光學(xué)顯微鏡觀察骨組織、骨髓組織、骨小梁結(jié)構(gòu)變化,分析每高倍視野單位面積下空骨陷窩率、單位視野面積內(nèi)骨小梁面積比、脂肪細(xì)胞直徑,確定造模成功。按時(shí)段提取大鼠股骨頭內(nèi)總RNA及總蛋白,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法從mRNA表達(dá)水平檢測(cè)激素性壞死股骨頭組織中Runx2、Osterix、AJ18及骨鈣素的表達(dá)情況,并用Westernblot方

3、法檢測(cè)各標(biāo)本Runx2、Osterix、AJ18及骨鈣素蛋白表達(dá),分析糖皮質(zhì)激素對(duì)其表達(dá)的影響及其在激素性股骨頭壞死發(fā)病、進(jìn)展過(guò)程中的作用。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)第8周取股骨頭標(biāo)本行病理學(xué)檢查,每高倍視野單位面積下空骨陷窩率(12.36％)、單位視野內(nèi)骨小梁面積(56.54％)、脂肪細(xì)胞最大直徑(24.52μm)均與正常組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.5),造模成功。實(shí)驗(yàn)8、10、12周時(shí),實(shí)驗(yàn)組大鼠股骨頭內(nèi)Runx2、Osterix及

4、OC的基因表達(dá)、蛋白合成較對(duì)照組減少,mRNA的表達(dá)量分別為正常組的0.9621、0.3259、0.0512,0.9661、0.2026、0.0194和0.2857、0.2027、0.1583,隨時(shí)間推移三者的基因表達(dá)、蛋白合成呈下降趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)組大鼠股骨頭內(nèi)AJ18的基因表達(dá)、蛋白合成較對(duì)照組增多,AJ18mRNA的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)后8、10、12周分別為正常組的3.5487、3.6303、3.7576。
　　 結(jié)論：激素性股骨頭壞死

5、組織中Runx2/Osterix、OC在mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于正常股骨頭組織,AJ18高于正常股骨頭組織,糖皮質(zhì)激素可能通過(guò)下調(diào)Runx2/OsterixmRNA和上調(diào)AJ18mRNA來(lái)抑制成骨細(xì)胞活性,抑制骨形成和骨修復(fù),促進(jìn)骨吸收,導(dǎo)致激素性骨質(zhì)疏松和股骨頭壞死；或者先造成骨質(zhì)疏松后,骨強(qiáng)度下降,應(yīng)力作用下骨小梁微骨折引起骨小梁超微結(jié)構(gòu)的改變,繼而出現(xiàn)骨修復(fù)和應(yīng)力作用下骨改建,隨時(shí)間推延,此病理過(guò)程反復(fù)發(fā)生,最終導(dǎo)致股骨頭壞死