補腎活血湯促進(jìn)兔激素性股骨頭缺血壞死修復(fù)機制的研究.pdf

1、目的:
　　通過補腎活血湯對激素性股骨頭缺血壞死兔模型的干預(yù)，觀察其對股骨頭內(nèi)主要成分含量、骨生物力學(xué)的影響，并檢測骨組織中wnt/β-catenin信號通路上成骨和成脂相關(guān)因子基因和蛋白的表達(dá)，由此來探討補腎活血湯防治激素性股骨頭缺壞死兔模型的機制。
　　方法:
　　6月齡新西蘭大白兔104只，隨機分成空白組26只，造模組78只。造模組采用賀氏造模法建立激素性股骨頭缺血壞死兔模型，經(jīng)HE染色進(jìn)行模型鑒定。將造模成功的

2、53只大白兔，隨機分成模型組27只和治療組26只。鑒定造模成功1周后，3組動物進(jìn)行灌胃，治療組用補腎活血湯5.05 g/kg/d，每天分早晚兩次在相同時間灌胃，連續(xù)8周，模型組和空白組采用等量的生理鹽水進(jìn)行灌胃，時間一致。在干預(yù)滿6周和8周時，分別處死一半兔子，取右側(cè)股骨頭檢測生物力學(xué)指標(biāo)（彈性模量、最大載荷、應(yīng)變能力）和股骨頭主要成分含量（鈣和羥脯氨酸）。用RT-PCR和Western Blot方法檢測左側(cè)股骨頭Wnt/β-caten

3、in信號通路上成骨和成脂相關(guān)因子的基因和蛋白表達(dá)。比較蛋白同組間6周和8周時，3組間6周和3組間8周時以上各指標(biāo)的變化與聯(lián)系;比較基因6周時3組間的變化。
　　結(jié)果:
　　1.光鏡觀察
　　空白組軟骨層較厚，軟骨細(xì)胞數(shù)量正常;骨小梁完整，排列規(guī)則，形態(tài)正常;偶見空骨陷窩;骨髓腔內(nèi)造血細(xì)胞豐富，脂肪細(xì)胞較少。模型組軟骨細(xì)胞大量減少、軟骨層變薄甚至缺損;骨髓腔內(nèi)填充大量的脂肪細(xì)胞，脂肪細(xì)胞增大或互相融合成大泡;骨髓造血細(xì)胞

4、減少，部分造血細(xì)胞核碎裂、核溶解，部分骨細(xì)胞固縮或消失、骨陷窩空虛多見;骨小梁變細(xì)、稀疏、連續(xù)性中斷、散亂，部分骨小梁出現(xiàn)壞死。
　　2.空骨陷窩率
　　與模型組相比，空白組空骨陷窩率較低，為（10.06±0.13）％;模型組明顯增高，為（29.68±1.23）％;兩者有顯著性差異P＜0.01。
　　3.股骨頭主要成分含量檢測
　　3.1 骨羥脯氨酸含量:6周與8周比較，空白組、模型組、治療組三組間均無差異(P＞

5、0.05)。6周、8周時的趨勢:空白組＞治療組＞模型組。8周和6周比較，空白組、治療組明顯增高，模型組略有增高。其中，空白組與模型組比較，6周、8周都有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;模型組與治療組比較，6周有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），8周有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。其余各組間無差異。
　　3.2 骨鈣含量:6周與8周比較，空白組、治療組組間均無差異（P＞0.05），模型組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。6周和8周趨勢:空白

6、組＞治療組＞模型組;空白組和治療組明顯增高，模型組明顯降低?？瞻捉M與模型組比較，6周(P＜0.01)、8周（P＜0.05）有統(tǒng)計學(xué)意義;模型組與治療組比較，6周（P＜0.05）、8周（P＜0.01）有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.股骨頭生物力學(xué)檢測
　　4.1 骨材料力學(xué)指標(biāo):彈性模量比較6周、8周趨勢:空白組＞治療組＞模型組，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。6周和8周比較，模型組有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。6周時，空白組與

7、模型組、模型組與治療組比較，均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。8周時，空白組與模型組比較，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);模型組與治療組比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　4.2 骨結(jié)構(gòu)力學(xué)指標(biāo):應(yīng)變能力6周時:空白組＞治療組＞模型組，組間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);8周時:空白組＞治療組＞模型組，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。其中，空白組與模型組比較，6周、8周有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;模型組與

8、治療組比較，6周、8周有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。6周和8周比較，空白組明顯增高，模型組略增高，治療組略降低。
　　最大載荷值6周和8周趨勢:治療組＞模型組、空白組＞模型組，組間差異均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;空白組和治療組明顯增高，模型組明顯降低;模型組間有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）?？瞻捉M與模型組比較，6周(P＜0.01)、8周（P＜0.05）有統(tǒng)計學(xué)意義:治療組與模型組比較，6周（P＜0.05）、8周（P＜0.0

9、1）有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5.Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá):①和模型組相比，空白組和治療組中成骨相關(guān)蛋白Wnt11、sFRP2、FZD6、Ror2的表達(dá)升高，隨時間延長增強效果呈略升趨勢;wnt9a的表達(dá)下降，隨時間延長呈下降趨勢。sFRP3只在8周時空白組和模型組間統(tǒng)計學(xué)比較有意義。sFRP2到8周時組間才有意義。wnt11和wnt9a只在6周時組間有意義，8周則沒有意義。FZD6和Ror26周和8周時組間統(tǒng)計

10、學(xué)都有意義。②和模型組相比，空白組和治療組中成脂相關(guān)蛋白DKK1、sFRP4、Wnt5b的表達(dá)明顯下降，wnt10b、β-catenin的表達(dá)升高。Wnt10b到8周時組間才有意義。β-catenin和sFRP4只在6周時組間有意義。在6周和8周時，DKK-1和Wnt5b組間都有意義，Wnt1無意義。
　　6 Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)基因的表達(dá):①6周時和模型組相比，空白組和治療組中成骨相關(guān)因子Wnt11、sFRP2

11、、Ror2和FZD6的表達(dá)明顯升高，wnt9a的表達(dá)明顯下降;sFRP3組間比較無意義。②6周時和模型組相比，空白組和治療組中成脂相關(guān)基因DKK-1、sFRP5、Wnt1、Wnt5b的表達(dá)明顯降低，wnt10b、β-catenin的表達(dá)升高。sFRP4組間比較無意義。
　　結(jié)論：
　　1.補腎活血湯能調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣磷代謝紊亂狀態(tài)，加速基質(zhì)合成，提高股骨頭的強度;增強骨的應(yīng)變能力和最大載荷值，提高骨的彈性模量，改善骨質(zhì)疏松狀態(tài)，使