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1、目的:研究芍藥苷對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,探討其對(duì)缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡及p38MAPK的影響,拓展該藥的研究和應(yīng)用范圍,為其臨床預(yù)防和治療腦血管疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
方法:通過(guò)線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型模擬局灶性腦缺血再灌注損傷。將健康SD大鼠隨機(jī)分為:假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組、芍藥苷組、SB203580組、SB203580+芍藥苷組。大鼠于MCAO前半小時(shí)腹腔注射生理鹽水或藥物,缺血1.5小時(shí)
2、再灌注24小時(shí)。用神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分評(píng)價(jià)大鼠腦缺血再灌注后行為障礙,用2,3,5一三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法測(cè)定梗死灶體積,用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。用Western blotting法及免疫組化法檢測(cè)p-p38, iNOS以及Fas和TNF-α的表達(dá)改變。
結(jié)果:1.神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:各用藥組再灌注24h時(shí)神經(jīng)功能缺損情況明顯輕于缺血再灌注組,神經(jīng)功能缺失癥狀改善,缺血再
3、灌注組與各用藥組比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2.再灌注24hTTC染色,各用藥組能顯著縮小 MCAO大鼠的梗死體積,降低梗塞率,減輕神經(jīng)細(xì)胞損傷程度,改善腦功能。3.TUNEL法檢測(cè)結(jié)果:假手術(shù)組腦組織中可見(jiàn)個(gè)別散在凋亡細(xì)胞,缺血再灌注組可見(jiàn)較多散在凋亡細(xì)胞,TUNEL染色陽(yáng)性;各用藥組陽(yáng)性細(xì)胞較缺血再灌注組明顯減少,其中SB203580+芍藥苷組與其它用藥組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。4.免疫組化
4、法觀察FAS和TNF-α蛋白的表達(dá):與假手術(shù)組相比,缺血再灌注組大鼠缺血側(cè)腦組織 FAS和 TNF-α蛋白的表達(dá)增多(P<0.01)。與缺血再灌注組比較,其余五組大鼠在藥物作用下,發(fā)生腦缺血再灌注后的FAS、TNF-α蛋白表達(dá)均有明顯差異(P<0.01)。芍藥苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦組織FAS、TNF-α蛋白的表達(dá)均有下調(diào)作用。5.蛋白免疫印跡分析:大鼠腦缺血再灌注后腦組織磷酸化p38蛋白和iNOS蛋白表達(dá)明顯增加,注射芍藥苷和SB20
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