化濁解毒活血通絡法對大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)細胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表達的影響.pdf

1、目的：觀察化濁解毒活血通絡方對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)細胞凋亡和相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax表達的影響，從細胞凋亡相關(guān)基因角度揭示其對腦缺血再灌注損傷后的神經(jīng)保護作用。
　　方法：以改進后的Zea-Longa線栓法通過阻斷大鼠右側(cè)大腦中動脈制造局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型。選取合格雄性成年SD大鼠54只，隨機分配給假手術(shù)組（即正常組）、模型組、阿司匹林組（即對照組）、化濁解毒活血通絡方低劑量組（簡稱“中藥低劑量組”）、化濁解毒

2、活血通絡方中劑量組（簡稱“中藥中劑量組”）、化濁解毒活血通絡方高劑量組（簡稱“中藥高劑量組”）六組，每組9只（n=9）。各組實驗動物均于造模成功后進行神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分，并于第2天分別給予藥物治療，假手術(shù)組與模型組兩組以0.9％氯化鈉替代藥物不給予治療，阿司匹林組給以阿司匹林溶液灌胃，應用中藥治療的不同濃度三組大鼠分別予相應化濁解毒活血通絡方中藥湯劑。持續(xù)灌服治療14天記錄實驗動物治療過程中一般情況，按實驗計劃再次評定各組實驗動物神經(jīng)

3、功能缺損程度，后迅速斷頭處死取各組大鼠梗死側(cè)大腦半球腦組織分別進行HE染色，在電子光鏡下拍照留圖以觀察腦組織缺血區(qū)域細胞形態(tài)變化，TUNEL法標記凋亡細胞統(tǒng)計陽性細胞數(shù)并計算凋亡率，應用熒光定量PCR法評測各組大鼠缺血側(cè)腦組織中Bcl-2及Bax蛋白的表達。
　　結(jié)果：⑴各組用藥后14天大鼠神經(jīng)功能缺損評分對比顯示：與模型組相比，中藥高劑量組及阿司匹林組大鼠神經(jīng)功能缺損程度明顯降低肢體功能恢復良好，具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05

4、），中藥中劑量及中藥低劑量組無顯著統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；中藥高劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損評分與阿司匹林組相比統(tǒng)計學差異無顯著性（P＞0.05）；與中藥低劑量組比較，中藥中劑量組和中藥高劑量組神經(jīng)功能缺損評分普遍下降，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與中藥中劑量組相比較中藥高劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損體征改善更優(yōu)（P＜0.05）。⑵Tunel染色的陽性細胞結(jié)果分析顯示：與假手術(shù)組相比，其余各組細胞凋亡率均明顯上升（P＜0.05）；與模型組相比

5、，各用藥組細胞凋亡率呈下降趨勢（P＜0.05）；阿司匹林組與中藥高劑量組無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；與中藥高劑量組相比，中藥中劑量組細胞凋亡率無明顯降低（P＞0.05）。⑶Bcl-2基因陽性細胞表達結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組Bcl-2基因的表達水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，各用藥組Bcl-2基因的表達水平均升高，具有顯著性差異（P＜0.05）；與阿司匹林組比較，中藥三組調(diào)高Bcl-2表達效果顯著（P＜0.05）；且

6、與中藥低劑量組相比，中藥中劑量組和中藥高劑量組Bcl-2表達明顯升高（P＜0.05）。⑷Bax基因陽性細胞表達結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，其余各組Bax基因的表達水平均升高，具有顯著性差異（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組Bax表達水平下降，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與阿司匹林組相比，中藥低劑量組Bax表達明顯處于較高水平，差異具有顯著性（P＜0.05）；與中藥低劑量組相比，中藥中劑量組和中藥高劑量組 Bax表達明顯減少（P＜0