化濁解毒活血通絡(luò)法在腦缺血再灌注損傷大鼠模型VEGF表達(dá)及微血管密度的影響.pdf

1、目的:本研究采用線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型，應(yīng)用化濁解毒活血通絡(luò)方進(jìn)行干預(yù)，通過對(duì)大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積、腦組織病理形態(tài)、血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及微血管密度等指標(biāo)的觀察，從治療性血管新生的角度，探討化濁解毒活血通絡(luò)方對(duì)腦缺血再灌注損傷發(fā)揮腦保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法:采用改良的線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型。健康雄性SD大鼠54只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、阿司匹林組、化濁解毒活血通絡(luò)方低

2、劑量組（文中簡(jiǎn)稱“中藥低劑量組”），化濁解毒活血通絡(luò)方中劑量組（文中簡(jiǎn)稱“中藥中劑量組”），化濁解毒活血通絡(luò)方高劑量組（文中簡(jiǎn)稱“中藥高劑量組”）6組，每組9只(n=9)。各組大鼠均于造模后第2天給予藥物治療，假手術(shù)組和模型組均予等量生理鹽水灌胃。阿司匹林組給予阿司匹林混懸液灌胃，中藥高、中、低劑量組灌服相應(yīng)濃度的化濁解毒活血通絡(luò)方中藥液。連續(xù)灌胃14天后對(duì)各組實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，斷頭處死后，每組選取3只大鼠斷頭取腦，進(jìn)行TT

3、C染色，測(cè)定梗死體積。每組其余6只斷頭后取右側(cè)大腦半球分別進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察缺血區(qū)大腦皮質(zhì)組織形態(tài)變化。免疫組織化學(xué)法標(biāo)記新生血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)數(shù)微血管密度，PCR法檢測(cè)缺血側(cè)腦組織VEGF表達(dá)含量。
　　結(jié)果:
　　1各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分:模型組與假手術(shù)組比較，神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，中藥低劑量組、中藥中劑量神經(jīng)功能缺損無明顯差異(P＞0.05)，阿司匹林組與中藥高劑量組神經(jīng)功能缺損

4、評(píng)分均降低(P＜0.05);與阿司匹林組比，中藥高劑量組神經(jīng)功能缺損評(píng)分無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2大鼠缺血側(cè)腦組織病理形態(tài)學(xué)改變:假手術(shù)組大鼠右側(cè)大腦皮層區(qū)細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞形態(tài)正常，無變性壞死細(xì)胞;模型組大鼠大腦皮層區(qū)可見明顯缺血區(qū)，組織排列紊亂，細(xì)胞間隙明顯增大，大量壞死神經(jīng)元細(xì)胞存在;中藥中劑量組、中藥高劑量組及阿司匹林組缺血區(qū)細(xì)胞明顯較模型組增多。阿司匹林組及中藥高劑量組神經(jīng)組織形態(tài)無明顯差異，可見少量神經(jīng)

5、壞死細(xì)胞。中藥低劑量組腦組織形態(tài)接近模型組。
　　3 TTC法檢測(cè)各組大鼠腦梗死體積，肉眼可見與假手術(shù)組相比各組均存在較明顯的梗死灶，其中模型組與中藥低劑量組梗死面積相當(dāng)(P＞0.05)，中藥中劑量組、中藥高劑量組及阿司匹林組較模型組相比梗死體積均有所減小(P＜0.05);阿司匹林組腦梗死體積小于中藥低劑量及中藥中劑量組（P＜0.05）;中藥高劑量組腦梗死體積與阿司匹林組無明顯差異（P＞0.05）。
　　4 PCR法檢測(cè)大鼠

6、缺血側(cè)腦組織中VEGF表達(dá)的情況:模型組VEGF表達(dá)含量明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05）;中藥中劑量組、中藥高劑量組及阿司匹林組VEGF表達(dá)含量均高于模型組(P＜0.05);且中藥高劑量組效果優(yōu)于中藥中劑量組(P＜0.05);中藥低劑量組VEGF表達(dá)含量與模型組相比無明顯差異（P＞0.05）;與阿司匹林組相比，中藥高劑量組VEGF表達(dá)含量無明顯差異（P＞0.05）。
　　5免疫組化法檢測(cè)微血管密度:光鏡下陽性細(xì)胞胞漿染色呈棕黃色，

7、細(xì)胞核呈圓形或類圓形，大多數(shù)陽性細(xì)胞集中于缺血區(qū)周圍。
　　各組大鼠MVD計(jì)數(shù)情況顯示:模型組MVD明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05）;與模型組相比，中藥中劑量、中藥高劑量及阿司匹林組MVD均增高(P＜0.05)，而中藥低劑量組則增高不明顯（P＞0.05）;與阿司匹林組相比，中藥中劑量組MVD水平降低(P＜0.05)，中藥高劑量組MVD增高水平與阿司匹林組相當(dāng)(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1化濁解毒活血通絡(luò)方能明顯

8、降低CIRI模型大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分，改善CIRI模型大鼠受損腦組織的病理形態(tài)學(xué)損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。
　　2化濁解毒活血通絡(luò)方能夠明顯減小CIRI模型大鼠腦梗死體積。
　　3化濁解毒活血通絡(luò)方能夠促進(jìn)CIRI后VEGF的表達(dá)，促進(jìn)血管新生，增加微血管密度，建立有效的側(cè)枝循環(huán)，保護(hù)缺血半暗帶。
　　4化濁解毒活血通絡(luò)方對(duì)腦缺血再灌注損傷的治療機(jī)制可能與促進(jìn)腦內(nèi)VEGF表達(dá)，促進(jìn)血管新生，建立側(cè)枝循環(huán)有關(guān)，且存在一定