缺血后處理對缺血再灌注大鼠腎臟p38MAPK和JNK的影響.pdf

1、缺血后處理是新近提出的一種減輕器官缺血再灌注損傷的新方法，指在缺血器官全面恢復(fù)再灌注之前給予反復(fù)多次的短暫再灌注－缺血處理。目前的研究業(yè)已證實(shí)，缺血后處理對心臟、肝臟、腦等器官具有保護(hù)作用。我科研究生已經(jīng)成功的建立了腎臟缺血后處理的大鼠模型，且證明缺血后處理對腎臟同樣具有保護(hù)作用。我們對此模型又進(jìn)行了改進(jìn)，在此基礎(chǔ)上探討缺血后處理對大鼠腎臟功能以及p38MAPK和JNK蛋白的影響。
　　目的：探討缺血后處理(ischemicpos

2、tconditioning，IPO)對缺血再灌注大鼠腎功能、腎臟p38MAPK和JNK蛋白的影響。
　　方法：將72只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（S）組、缺血-再灌注（IR）組、缺血后處理（IPO）組,每組又分為8個(gè)時(shí)間段（0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h）。S組分離出左腎動(dòng)脈，結(jié)扎右腎蒂，暴露45min后關(guān)腹；IR組結(jié)扎右腎蒂，用血管夾阻斷左腎動(dòng)脈45min后恢復(fù)血供；IPO組結(jié)扎右腎蒂，用血管夾阻斷左腎動(dòng)

3、脈45min后給予反復(fù)10次的恢復(fù)血供20s-阻斷血供20s處理，然后再恢復(fù)血供。腎臟完全恢復(fù)血供后不同時(shí)段（0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h）留取血和腎組織標(biāo)本，應(yīng)用生化分析儀檢測腎功能和化學(xué)法檢測尿NAG酶，采用免疫組織化學(xué)和Western印跡方法檢測上述三組腎組織中的p38MAPK、JNK蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1.與S組相比，IR組的血BUN和Scr均顯著增高(P<0.05),從1h開始

4、輕微升高,24h達(dá)最高峰[BUN(30.97±9.96)mmol/L，SCr(238.3±54.2)μmol/L(P<0.05)],48h開始回落到基線水平，72h無明顯變化；IPO組血BUN和Scr略有降低，但各時(shí)間段與S組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與IR組相比，IPO組的血BUN和Scr總體水平低于IR組(P<0.05)，其高峰出現(xiàn)在12h[BUN(15.8±0.9)mmol/L，SCr(44.7±3.5)μmol/L(P

5、<0.05)]，但24h下降變化最明顯[BUN(8.0±0.6)mmol/L，SCr(44.0±4.6)μmol/L(P<0.05)]。
　　2.與S組相比，IR組和IPO組尿NAG酶均高于S組(P<0.05)。IR組尿NAG酶在術(shù)后6h達(dá)高峰[(98.47±2.69)U/L(P<0.05)]，此后逐漸下降，48h回到基線水平；IPO組尿NAG酶高峰出現(xiàn)于3h[(99.78±7.91)U/L(P<0.05)]。與IR組無相，IPO

6、組6h下降最顯著[(40.51±1.44)U/L(P<0.05)]，一直持續(xù)到12h，48h回到基線水平。
　　3.光鏡下觀察，p38MAPK和JNK在近端和遠(yuǎn)端腎小管上皮細(xì)胞都有表達(dá)，以近端腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)為主。以S組為對照，IR組p38MAPK和JNK都在術(shù)后0.5h開始升高，1h達(dá)高峰[p38MAPK(96.6±3.7)％，JNK(89.8±6.1)％(P<0.05)]，3h開始有所回落，6h基本回到基線。隨著再灌注的時(shí)間

7、延長，12h又開始大量表達(dá)，24h又達(dá)高峰[p38MAPK(93.2±4.1)％，JNK(95.6±4.4)％(P<0.05)]，此后開始回落，48h回到基線水平，72h后也無明顯變化。IPO組的p38MAPK/JNK蛋白表達(dá)較IR組明顯減弱，以1h和24h減弱最顯著，分別為[p38MAPK(49.8±22.5)％，JNK(28.4±5.3)％(P<0.05)]和[p38MAPK(44.4±19.5)％，JNK(50.4±10.2)％(

8、P<0.05)]。
　　Westernblot方法證實(shí)，與S組相比，IR組和IPO組的p38MAPK和JNK蛋白表達(dá)強(qiáng)度增高。IR組p38MAPK和JNK蛋白在0.5h就有表達(dá)，1h[p38MAPK(1.03±0.08)，JNK(0.68±0.03)(P<0.05)]和24h[p38MAPK(0.68±0.06)，JNK(0.77±0.06)(P<0.05)]表達(dá)強(qiáng)度最明顯。IPO組p38MAPK和JNK蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯較IR組降