烏司他丁、缺血預(yù)處理、缺血后處理聯(lián)合對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、目的復(fù)雜的腎臟手術(shù)，如腎移植術(shù)、腎實(shí)質(zhì)切開(kāi)取石術(shù)、腎腫瘤的腎部分切除術(shù)，血管外科的主動(dòng)脈修補(bǔ)術(shù)等術(shù)中均需要阻斷腎臟血流引起腎缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)損傷。常溫下阻斷腎血流時(shí)間超過(guò)40 min，將導(dǎo)致急性腎功能衰竭，I/R損傷也是腎移植中影響移植腎早期功能恢復(fù)及長(zhǎng)期存活的主要因素。如何預(yù)防和減I/R損傷，一直是腎臟保護(hù)中的主要課題。本研究前期實(shí)驗(yàn)成功制備了大鼠腎臟I/R損傷模型及大鼠腎臟I/R損傷的缺

2、血后處理(ischemic postconditioning,IPo)模型，觀察到烏司他丁(ulinastain，U)預(yù)先給藥、缺血預(yù)處理(ischemicpreconditioning，IP)、IPo能夠通過(guò)清除自由基，增強(qiáng)SOD活性，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡而減輕大鼠I/R腎損傷。缺血再灌注損傷是由許多因素造成的復(fù)雜的病理生理過(guò)程，缺血損傷能夠?qū)е聛喼滤佬约?xì)胞損傷，而更被再灌注時(shí)各種細(xì)胞內(nèi)來(lái)源的活性氧而加重?fù)p傷；此外，炎性介

3、質(zhì)前體的形成，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的聚集和活化則進(jìn)一步加重?fù)p傷；微循環(huán)的阻塞可導(dǎo)致無(wú)灌流區(qū)域的形成和引起缺血損傷。針對(duì)單一介質(zhì)或機(jī)制的保護(hù)措施要達(dá)到理想的保護(hù)效果是很困難的。本研究在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上探討缺血預(yù)處理、缺血后處理以及烏司他丁聯(lián)合對(duì)大鼠腎I/R損傷的影響及其機(jī)制。為臨床保護(hù)缺血再灌注損傷腎臟建立一種新的、更合理的方式，為減輕腎損傷，保護(hù)腎功能提供理論依據(jù)。方法36只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組(n=6)，假手術(shù)組(S組)，

4、缺血再灌注組(I/R組)，缺血預(yù)處理聯(lián)合后處理組(IP+IPo組)，烏司他丁聯(lián)合缺血預(yù)處理組(U+IP組)，烏司他丁聯(lián)合缺血后處理組(U+IPo組)，烏司他丁、缺血預(yù)處理聯(lián)合后處理組(U+IP+IPo組)。 10％水合氯醛3 ml/kg腹腔注射麻醉，采用夾閉雙側(cè)腎蒂45 min、再灌注6 h制備腎臟I/R損傷模型。用無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂，腎臟顏色變?yōu)榘导t色即可確認(rèn)腎臟血流阻斷，造成雙側(cè)腎缺血45 min后，松開(kāi)動(dòng)脈夾，腎臟由

5、暗紅色恢復(fù)鮮紅色即可確認(rèn)血流恢復(fù)，夾閉和放開(kāi)腎蒂時(shí)腹腔內(nèi)各注射林格液20 ml/kg。S組僅行開(kāi)腹，游離出雙側(cè)腎臟，分離雙側(cè)腎蒂不夾閉，傷口用生理鹽水紗布覆蓋，暴露45min不作腎缺血處理；I/R組夾閉雙側(cè)腎蒂，缺血45 min后放開(kāi)動(dòng)脈夾；IP+IPo組在缺血前先給予夾閉雙側(cè)腎蒂缺血5min，再灌注5 min，反復(fù)3次，夾閉雙側(cè)腎蒂缺血45 min后再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)3次，再恢復(fù)血液灌注6 h；U+IP組：缺血前30

6、min經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁2×104U/kg，夾閉雙側(cè)腎蒂缺血5 min再灌注5 min反復(fù)3次，即給予夾閉雙側(cè)。腎蒂缺血45 min后，再恢復(fù)血流灌注6h；U+IPo組缺血前30 min經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁2×104 U/kg，夾閉雙側(cè)腎蒂缺血45 min后，再灌注10 s，缺血10 s，反復(fù)3次，再恢復(fù)血液灌注6 h；U+IP+IPo組缺血前30 min經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁2×104U/kg，余操作同IP+IPo組。 再灌注

7、6 h時(shí)處死大鼠，酶法測(cè)定血清肌酐(Cr)水平、苦味酸不除蛋白法測(cè)定尿素氮(BUN)水平；放射免疫分析法測(cè)定尿α1-微球蛋白(α1-MG)水平；硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定腎組織丙二醛(MDA)含量和黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性；原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)腎組織中凋亡細(xì)胞，計(jì)算凋亡指數(shù)(apopatic index，AI)；采用免疫組化(SP)法觀察腎組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和Casp

8、ase-3的表達(dá)，計(jì)算蛋白陽(yáng)性染色指數(shù)(positive index,PI)；蘇木素-伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。結(jié)果與S組比較，再灌注6h時(shí)，I/R組、IP+IPo組、U+IP組、U+IPo組、U+IP+IPo組血清Cr和BUN濃度明顯升高(P<0.05)，尿α1-MG含量增加(P<0.05)，腎組織SOD活性降低(P<0.05)，MDA含量增加(P<0.05)，Bcl-2蛋白PI降低(P<0.05)，Bax蛋白P

9、I升高(P<0.05)，Caspase-3蛋白PI升高(P<0.05)，腎組織凋亡指數(shù)(AI)增加(P<0.05)，病理學(xué)損傷明顯。 與I/R組相比，IP+IPo組、U+IP組、U+IPo組、U+IP+IPo組血清Cr和BUN濃度明顯降低(P<0.05)，尿α1-MG含量減少(P<0.05)，腎組織SOD活性升高(P<0.05)，MDA含量減少(P<0.05)，Bcl-2蛋白PI升高(P<0.05)，Bax蛋白PI降低(P<0.

10、05)，Caspase-3蛋白PI降低(P<0.05)，腎組織凋亡指數(shù)(AI)減少(P<0.05)，光鏡下可見(jiàn)腎組織損傷明顯減輕。 與U+IP組比較，U+IP+IPo組尿α1-MG含量減少(P<0.05)，腎組織SOD活性降低(P<0.05)，腎組織凋亡指數(shù)(AI)減少(P<0.05)；與U+IP組比較，U+IPo組腎組織凋亡指數(shù)(AI)減少(P<0.05)。與IP+IPo組比較，U+IP+IPo組Bcl-2蛋白PI升高(P<0

11、.05)。與U+IPo組比較，U+IP+IPo組Bcl-2蛋白PI升高(P<0.05)。IP+IPo組、U+IP組、U+IPo組、U+IP+IPo組其余指標(biāo)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論1 缺血預(yù)處理聯(lián)合后處理、烏司他丁聯(lián)合缺血預(yù)處理、烏司他丁聯(lián)合缺血后處理和烏司他丁、缺血預(yù)處理聯(lián)合后處理均可減輕大鼠腎I/R損傷，改善腎功能。其主要機(jī)制可能與通過(guò)直接清除自由基，增強(qiáng)SOD活性，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。