芹菜素與TRAIL合用對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　研究芹菜素(apigenin, API)增敏腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)誘導(dǎo)人肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡作用;并探討其作用機(jī)制是否涉及耗竭細(xì)胞谷胱甘肽(glutathione, GSH)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人肝癌Hep G2細(xì)胞和人胚肝L-02細(xì)胞;MTS比色法測(cè)定細(xì)胞活性;碘化丙啶(propidium iod

2、ide, PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)分析細(xì)胞凋亡率(Sub G1細(xì)胞百分率);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定細(xì)胞天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases, caspase-3)活性;分光光度法(spectrophotometry)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)

3、 GSH含量;異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標(biāo)記死亡受體-5(Death receptor5, DR5)抗體FCM分析細(xì)胞DR5表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　MTS比色法測(cè)定結(jié)果顯示:單用5.0μmol/L API以及單用TRAIL(在10~1000ng/mL濃度范圍內(nèi))作用24 h,抑制Hep G2細(xì)胞活性作用微弱,與溶媒對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義。5.0μmol/L

4、API預(yù)孵育1 h,10~1000ng/mL TRAIL作用24 h,抑制Hep G2細(xì)胞活性作用顯著增強(qiáng)(P<0.05);然而,對(duì)L-02細(xì)胞活性抑制作用微弱。PI染色FCM分析結(jié)果表明:單用5.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL以及兩者合用處理24 h,Hep G2細(xì)胞的凋亡率分別為2.44％±0.34%、2.36%±0.08%和30.23%±4.89%;L-02細(xì)胞的凋亡率分別是0.36%±0.07%、0.37

5、±0.03%和0.37±0.03%。ELISA測(cè)定細(xì)胞caspase-3活性結(jié)果發(fā)現(xiàn):在Hep G2細(xì)胞系,5.0μmol/L API和100 ng/mL TRAIL合用顯著增強(qiáng)誘導(dǎo)caspase-3激活(P<0.05),caspase-3特異抑制劑(10μmol/L Ac-DEVD-CHO)能有效阻斷兩者合用激活caspase-3作用(P<0.05);在L-02細(xì)胞系,5.0μmol/L API和100 ng/mLTRAIL無(wú)任單用亦

6、或合用對(duì)細(xì)胞caspase-3活性的影響小。分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH含量結(jié)果證明:在5.0μmol/L~20.0μmol/L濃度范圍內(nèi),API以濃度依賴方式降低Hep G2細(xì)胞內(nèi)GSH含量(P<0.05);而對(duì)L-02細(xì)胞內(nèi)GSH含量無(wú)明顯影響。FITC標(biāo)記DR5抗體的FCM分析顯示: API(5.0μmol/L、10μmol/L、20.0μmol/L)上調(diào)Hep G2細(xì)胞DR5表達(dá),呈濃度依賴性(P<0.05);而在L-02細(xì)胞系中

7、,無(wú)此作用。另外,添加外源性GSH(500μmol/L GSH預(yù)孵育1 h)能夠有效拮抗API降低Hep G2細(xì)胞內(nèi)GSH水平和上調(diào)DR5蛋白表達(dá)作用以及API和100 TRAIL合用抑制細(xì)胞活性、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和caspase-3活化作用(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.亞毒性濃度的API具有增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)人肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡作用。
　　2.亞毒性濃度的API與TRAIL合用對(duì)人胚肝L-02細(xì)胞凋亡影響