Midazolam對(duì)肝癌Hep G2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：PBR配體能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。Midazolam屬于PBR的部分激動(dòng)劑，但其對(duì)肝癌Hep G2細(xì)胞的影響目前未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)研究苯二氮卓類藥物Midazolam對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其作用的機(jī)制。
　　 方法：人肝癌Hep G2細(xì)胞于含10％胎牛血清、100μg/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃、CO2分壓為5％、濕度85％的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)

2、數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。MTS法檢測(cè)各不同濃度的Midazolam、PK11195、Midazolam+PK11195處理后的人肝癌Hep G2細(xì)胞在24h、48h、72h的增殖率。采用Annexin-V/PI雙染的方法，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的Midazolam處理24h后對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞凋亡的影響。采用Hoechst33342熒光染料，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察不同濃度的Midazolam處理24h后對(duì)人肝癌Hep G2凋亡的影響及

3、細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的改變。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的Midazolam處理的人肝癌Hep G2細(xì)胞12h后，Bax，Bcl-2，Caspase-3蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：1)M組：不同濃度的Midazolam對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖有抑制作用，該作用呈濃度相關(guān)性和時(shí)間相關(guān)性；P組：不同濃度的PK11195對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖有抑制作用，該作用呈濃度相關(guān)性和時(shí)間相關(guān)性，該組各濃度對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖有抑

4、制作用，且比M組強(qiáng)；P+M組：不同濃度的Midazolam+PK11195對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖均呈現(xiàn)抑制作用，但沒(méi)有拮抗作用，相反，兩者合用增強(qiáng)了單獨(dú)應(yīng)用Midazolam的效果；2)不同濃度的Midazolam對(duì)人肝癌Hep G2細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用，該作用呈濃度相關(guān)性。與對(duì)照組相比，最高濃度組10-3M的Midazolam作用24小時(shí)促使人肝癌Hep G2的凋亡率達(dá)到(91.2±3.4)％，(P＜0.05)，最低濃度組10

5、-7M的Midazolam促使人肝癌Hep G2的凋亡率也達(dá)到(5.8±0.9)％，(P＞0.05)。各濃度組的促凋亡呈現(xiàn)出以早期凋亡為主；3)與對(duì)照組相比，各濃度的Midazolam處理組均引起了人肝癌Hep G2形態(tài)學(xué)上的改變，其中以10-3M改變最為明顯，表現(xiàn)為細(xì)胞密度大幅度的下降，細(xì)胞核固縮，核碎裂，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，呈高亮藍(lán)色，其它各濃度組也有不同程度的改變；4)與對(duì)照組相比，不同濃度的Midazolam作用12h后，可促進(jìn)Hep

6、 G2細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)，同時(shí)降低Bcl-2蛋白的表達(dá)，Bax蛋白表達(dá)增多，使Bcl-2/Bax蛋白比例下調(diào)，但各處理組間并無(wú)明顯呈現(xiàn)濃度相關(guān)性。
　　 結(jié)論：Midazolam可抑制人肝癌Hep G2細(xì)胞的增殖，該作用呈濃度和時(shí)間相關(guān)性，且該作用不能被PK11195逆轉(zhuǎn)；Midazolam可促進(jìn)人肝癌Hep G2細(xì)胞的凋亡，該作用呈濃度相關(guān)性；Midazolam可引起人肝癌Hep G2細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的改變，表現(xiàn)為核